Spherisorb色谱柱的使用注意事项

为确保Spherisorb色谱柱始终保持理想性能，请遵循以下原则：

A.保护柱

  在进样器和分析柱之间使用填料化学性质和颗粒大小都适合的沃特世Spherisorb保护柱。使用匹配的保护柱，是保护分析柱而不影响或改变分析分离度的重要措施。保护柱需要根据样品污染情况定期更换。当系统背压稳步上升至设定压力限值时，通常表明需要更换保护柱。突然出现分叉峰或色谱性能发生其他变化也表明需要更换保护柱。

B. 样品制备

1. 样品中的杂质往往会污染色谱柱。避免污染的一种方法是在分析之前使用填充适用填料的Oasis固相萃取小柱/色谱柱或Sep-Pak小柱净化样品。

2. 制备样品时，优先选用运行分析时要用的流动相，或选用与之相比更弱的流动相(就反相色谱而言，即有机改性剂含量更少；就正相色谱或亲水作用色谱而言，即极性改性剂含量更少；就离子交换色谱而言，即盐含量更少)，以便获得理想峰形和灵敏度。

3. 如果样品不溶于流动相，请确保样品、溶剂和流动相可以混溶，以避免样品和/或缓冲液产生沉淀。用0.2 μm滤膜过滤样品，去除颗粒物质。如果用于溶解样品的溶剂含有机溶剂(如乙腈、甲醇等)，请确保滤膜材料不溶于该溶剂。请联系滤膜生产商了解滤膜的溶剂兼容性。或者，可以考虑在8,000 rpm下离心样品溶液20 min，然后将上清液转移至适当的样品瓶中。

C. pH范围

  Spherisorb色谱柱的推荐pH范围为2-8。表3列出了常用的缓冲液和添加剂。

此外，柱寿命将根据操作温度以及使用的缓冲液类型和浓度而有所不同。例如，在高温下使用pH值为8的磷酸盐缓冲液会缩短色谱柱寿命。

D. 溶剂

  为了保持理想的色谱柱性能，请使用高品质色谱级溶剂。所有水相缓冲液使用前都必须过滤。推荐使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®过滤器。含有悬浮颗粒物的溶剂通常会堵塞色谱柱入口筛板的外表面，这会导致操作压力增大，性能变差。使用前，请将所有溶剂彻底脱气，避免泵和检测器中形成气泡。沃特世还建议使用在线脱气装置。运行低压梯度时，溶剂脱气尤其重要，因为在梯度运行过程中混合水相溶剂与有机溶剂时可能形成气泡。

E. 压力

  Spherisorb色谱柱可承受的压力上限为6,000 psi(400 bar或40MPa)，但为了尽可能延长色谱柱和系统使用寿命，应避免常规运行压力长期超过4,000-5,000 psi。

F. 温度

  为了改善选择性、降低溶剂粘度和提高传质速率，操作Spherisorb色谱柱推荐的温度范围为20-45℃。但是，任何高于室温的温度都可能对色谱柱寿命产生不良影响，色谱柱寿命还会根据pH和缓冲液条件而有所不同。

IV. 故障排除

  保留时间、分离度或柱压变化通常是色谱柱污染所致。请参阅“色谱柱清洗、再生和存放”。色谱柱故障排除的信息可以在沃特世色谱柱及消耗品简要指南上查找。