a. 使用窄径（内径<3.0 mm）色谱柱

  本节将介绍如何尽量减少柱外效应，并介绍在HPLC系统中尽可能提高窄径色谱柱性能的原则。使用内径3.0 mm的窄径色谱柱时通常无需更改系统配置。但使用内径2.1mm的色谱柱时，需要更改HPLC系统配置才能避免系统谱带展宽体积过大。如果不恰当地更改系统配置，会因系统谱带展宽体积过大而导致峰展宽，随着峰体积减小，这会对峰宽造成严重影响。

b. 谱带展宽体积对内径2.1 mm的色谱柱性能的影响

注：在色谱柱后使用分流器会加剧谱带展宽。

  系统优化可能对灵敏度和分离度产生巨大影响，对于配置了分流器的系统尤其如此。优化措施包括使用深度正确的锥箍以及尽可能减小管路内径和长度。图9给出了一个示例，通过

优化LC-MS/MS系统，测定代谢物的灵敏度和分离度提高了一倍。

c. 未优化和优化LC-MS/MS系统对比：系统配置更改建议

1. 将微内径检测器流通池与内径­ 2.1 mm的 色谱柱配合使用

注：为减小谱带展宽体积而缩短流通池光程时，检测器灵敏度也会随之降低。

2. 尽可能减小样品定量环体积。

3. 在泵和进样器之间使用0.009英寸(0.25 mm)的管路。

4. 对于标准系统，其余连接也请使用0.009英寸（0.25 mm）的管路，对于窄径（内径2.1 mm）系统，其余连接请使用0.005英寸（0.12 mm）的管路。

5. 使用完全接合的（预切割）连接（如果使用不同供应商的色谱柱，请使用深度可调的入口）。

6. 检测器的时间常数应缩小至0.2 s以下。

d. 沃特世小粒径(3.5 ­m)色谱柱-快速色谱分离

  填充3.5μm颗粒的沃特世色谱柱可实现更快速、更高效 的分离，而不会缩短色谱柱使用寿命。本节将介绍使用填充3.5μm颗粒的色谱柱进行分离时要考虑的5个参数。

注：为保留填料，填充3.5μ­m颗粒的色谱柱出口筛板较小。请勿反冲此类色谱柱。

1. 流速-3.5μm色谱柱的理想流速高于5μm色谱柱。使用此类色谱柱可以提高效率和缩短分析时间。但是，较高的流速会导致柱压增加。请使用适合系统的流速。

2. 柱压-3.5μm色谱柱的柱压高于同尺寸的5μm色谱柱。缩短色谱柱长度可抵消柱压增量，并缩短分析时间。

3. 温度-使用较高的温度可降低因粒径较小而产生的柱压（请参阅色谱柱维护和使用手册第III.f.节中建议的温度）。

4. 采样速率-请使用大约每秒10个数据点的采样速率。

5. 检测器时间常数-请使用0.1 s作为时间常数，以实现快速分析。