Bio-Rad/伯乐 品牌
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美国伯乐 羟基磷灰石与氟代磷灰石层析
分离机理:
羟基磷灰石 (Ca5(PO4)3OH2) 和氟代磷灰石 (Ca10(PO4)6F2) 是磷酸钙的一种形式，具有独te的选择性和分辨率，经常能分离一些其它层析和电泳技术无法区分的蛋白质，是唯yi直接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析介质，高度耐碱，生物安全性最高。其中 PO43-离子与带正电的蛋白质以离子键结合，具有阳离子交换特性，可由 NaCl 浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱 ( 左图 )，其中的 Ca2+ 离子与带负电蛋白质的自由羧基以金属螯合方式结合，该结合方式对 NaCl 不敏感，可由磷酸钠浓度梯度洗脱 ( 中图 )。因此该介质既可以用磷酸钠单梯度洗脱，也可以采用 NaCl 梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液平衡，再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型，从而达到更高的分辨率和更好的分离效果 ( 右图 )。
羟基磷灰石类型选择:
对于羟基磷灰石，伯乐提供Bio-rad CHT陶瓷羟基磷灰石和 Bio-gel 晶体羟基磷灰石两种介质，陶瓷化形式是由晶体羟基磷灰石在高温下烧结而成，以形成更硬，更坚固的层析介质。羟基磷灰石因陶瓷化工艺不同分为 2 种类型：I 型和 II 型。
■I型对蛋白质具有更大的保留，对酸性蛋白质具有更大的动态载量，主要纯化大部分蛋白质。
■II 型由于孔径较I型大，因而对抗体等大分子量蛋白质的动态载量更高，而对白蛋白几乎无保留，因而更适合于抗体的纯化，同时II型对核酸具有更大的保留，能够分辩单、双链、是否超螺旋等各种高级结构的核酸，因而也适合纯化核酸。
■CFT 氟代磷灰石介质具有和 CHT 陶瓷羟基磷灰石相似的蛋白选择特性，但可以在更低的 pH 条件下进行纯化。
■颗粒大小选择
羟基磷灰石的分离策略：
由于羟基磷灰石层析的上样对 NaCl 不敏感，更适合作为中间纯化和精纯的常规步骤，经第一步离子交换捕获得到的样品不需作任何脱盐处理即可直接上样纯化，具有更高的分辨率。层析条件的摸索参数主要有：型号，磷酸盐缓冲液的不同 pH，单梯度，双梯度等等。
货号 | 产品 | 包装 | 动态载量 | 颗粒大小 | pH稳定性 | 推荐流速cm/hr | 耐受压力Psi/MPa |
Bio-rad CHT陶瓷羟基磷灰石 | 球形巨孔的羟基磷灰石，避免了晶体材料的局限性，可用于工业层析柱，既保留了晶体羟基磷灰石独te的分离特性，同时可在高流速大型层析柱反复使用。 | ||||||
158-2000 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I | 10g | 25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 20μm | 5.5-14 | 50-1,000 | 1,500/10.0 |
157-0020 | CHT 陶瓷羟基磷灰石I 型 | 100g | |||||
157-0021 | 1kg | ||||||
157-0025 | 5kg | ||||||
158-4000 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I | 10g | 25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 40μm | 5.5-14 | 50-1,000 | 1,500/10.0 |
157-0040 | CHT 陶瓷羟基磷灰石I 型 | 100g | |||||
157-0041 | 1kg | ||||||
157-0045 | 5kg | ||||||
158-8000 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I | 10g | 25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 80μm | 5.5-14 | 50-1,000 | 1,500/10.0 |
158-0080 | CHT 陶瓷羟基磷灰石I 型 | 1kg | |||||
158-0081 | 5kg | ||||||
158-0085 | 10g | ||||||
158-2200 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II | 100g | 15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 20μm | 5.5-14 | 50-1,000 | 1,500/10.0 |
157-2000 | CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型 | 1kg | |||||
157-2100 | 5kg | ||||||
157-2500 | 10g | ||||||
158-4200 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II | 10g | 15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 40μm | 5.5-14 | 10-1,500 | 1,500/10.0 |
157-4000 | CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型 | 100g | |||||
157-4100 | 1kg | ||||||
157-4500 | 5kg | ||||||
158-8200 | CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II | 10g | 15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm) | 80μm | 5.5-14 | 10-1,500 | 1,500/10.0 |
157-8000 | CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型 | 100g | |||||
157-8100 | 1kg | ||||||
157-8500 | 5kg | ||||||
* 介质的包装密度为0.63g/mL，约10g 的包装可装填17mL的层析柱。
货号 | 产品 | 包装 | 动态载量 | 颗粒大小 | pH稳定性 | 推荐流速cm/hr | 耐受压力Psi/MPa |
Bio-Gel 羟基磷灰石HT和HTP | 传统羟基磷灰石凝胶，是纯化蛋白、核酸及其它大分子的理想产品，其中Bio Gel HTP 凝胶大大提高了对DNA 的载量和选择性。 | ||||||
130-0150 | Bio-Gel HT Hydroxyapatite | 250ml | 10mgBSA/g | 5.5-14 | 25-100 | ||
130-0151 | 500ml | ||||||
130-0420 | Bio-Gel HTP Hydroxyapatite | 100g | 5.5-14 | 35-100 | |||
130-0421 | 1kg | ||||||
130-0425 | 5kg | ||||||
130-0520 | DNA grade | 100g | >800ug DNA | 5.5-14 | >5 | ||
陶瓷氟代磷灰石CFT | 最新的磷灰石介质，pH 稳定范围更大，zui低pH 可达5.0，与CHT 陶瓷羟基磷灰石一样支持双梯度洗脱，载量更高，适宜于pH 低至5.0 时进行的酸性蛋白质的纯化。均匀坚固的球形颗粒，可快速完成清洗和平衡。 | ||||||
158-5200 | CHT 陶瓷羟基磷灰石II 型 | 10g | IgG: 30-32 | 40μm | 5-14 | 50-300 | 800/5.5 |
157-5000 | 100g | 溶菌酶:17-21 | |||||
157-5100 | 1kg | ||||||
157-5500 | 5kg | ||||||
* 动态载量测定条件：线性流速150cm/hr，层析柱1.1×5.2cm，样品1mg/mL 牛IgG 或2mg/mL 溶菌酶。
