01 新guan研究病理评估

● HALO数字病理图像分析平台

数字病理作为理解新*疾病的工具之一，在描述病毒攻击人体的机制，理解免疫系统对疾病做出反应，以及指导治疗和影响患者预后至关重要。

HALO是数字病理图像分析的优秀者，在新*的发病机制、疫苗、患者的治疗及预后等研究的重要工中，将会成为您*的研究助手。HALO数字病理图像分析平台结合HALO-Link图像管理平台，可极大的满足您对组织图像的查看、注释、分析、管理、共享等需求。
 
Indica Labs 于2020年5月份和美国国立卫生研究院（National Institutes of Health）合作启动了在线的新*数字病理学资料库（COVID-DPR），用以托管高分辨率的新*相关的人体组织数字图像。

应用文献概览:

（1）HALO在SARS-CoV-2疫苗研究中的应用

仓鼠大剂量鼻内SARS-CoV-2感染会导致严重的临床疾病，包括组织中病毒复制水平高、严重的肺炎、体重减轻和部分动物死亡。

表达稳定型SARS-CoV-2突刺蛋白的腺病毒血清型26载体疫苗的单次免疫可引起结合和中和抗体反应，并防止SARS-CoV-2引起的体重减轻、肺炎和死亡。

这些数据证明了针对SARS-CoV-2临床疾病的疫苗保护作用。该模型可用于SARS-CoV-2疫苗的临床前研究、治疗方法和发病机理。

·  文中涉及的HALO病理图像分析：
在每只动物至少一个肺叶的横截面上，使用HALO定量平台进行分析。在有多个横截面的情况下，每个肺叶被量化为一个单独的数据点。

使用Multiplex IHC算法对表达SARS-CoV-N和Iba-1蛋白的阳性细胞和百分比进行定量分析。对于SARS-CoV-2 RNAscope ISH和Mx1，使用Area Quantification（面积定量模块）确定SARS-CoV-2反义或正义探针的表达量及Mx1蛋白占总组织面积的百分比。

对于MPO(中性粒细胞)和CD3+细胞定量，剔除血管 (>5 mm2), 支气管、细支气管、软骨和结缔组织区域，并使用CytoNuclear模块对MPO+及CD3+细胞进行定量分析并计算其细胞密度。

 在所有的定量分析中，对每个样本的所有图像均进行人工复核，以确保标注及定量分析的准确性。

Reference：
Tostanoski, L.H., Wegmann, F., Martinot, A.J. et al. Ad26 vaccine protects against SARS-CoV-2 severe clinical disease in hamsters. Nat Med (2020). .

（2）HALO在SARS-COV-2感染后的免疫事件研究中的应用

该研究对SARS-COV-2感染后的免疫事件进行了调查，从急性炎症状态到感染后4周，非人类灵长类动物(NHP)的肺部病理具有异质性。急性期的特征是CD16+单核细胞从血液中快速迁移，同时肺中CD16+巨噬细胞增多。

研究中确定了两个间质巨噬细胞亚群(DR+ CD206-)，一个与血浆中IL-6水平直接相关的过渡性CD11c+ CD16+群体，以及一个长期存在的CD11b+ CD16+群体。研究结果揭示了新guan的细胞机制，并验证了NHP作为免疫疗法测试模型的有效性。

文中涉及的HALO病理图像分析：

使用HALO软件对病理病变进行定量分析。HALO Tissue Classifier 用于识别肺部RM和AGM区域的fluidic和cellular炎症。根据肺部受累的比例，分别对fluidic和cellular炎症进行评分。
 
Reference：
Fahlberg, M.D., Blair, R.V., Doyle-Meyers, L.A. et al. Cellular events of acute, resolving or progressive 新guanin SARS-CoV-2 infected non-human primates.

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02 新guan疫苗免疫学应答评价

●   AID酶联斑点分析仪-ELISPOT

· 德国艾迪（AID）与ELISPOT
 德国艾迪（AID）是一家专业研发并生产酶联斑点分析仪，细胞分析仪，病毒噬斑分析仪，菌落分析仪，Elispot酶联斑点分析试剂，PCR诊断试剂的公司。
•ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫水平的有效方法。
•*标准：国际上普遍采用ELISPOT方法监测HIV疫苗研究中的免疫应答反应，在国际艾滋病疫苗行动计划中，采用ELISPOT法对T细胞功能进行评价。

· ELISPOT在疫苗研发中的应用
（1）疫苗研发和动物实验
  ·抗原表位筛选
  ·免疫效果评价
  ·疫苗的细胞免疫效果评价

（2）疫苗临床试验
  ·评价疫苗抗原的免疫应答

（3）疫苗生产过程中的质控
  ·鉴定疫苗的免疫效果是否一致稳定

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03 新guan疫苗检测蛋白分析

● MSD电化学发光免疫分析技术

MSD在疫苗检测应用：

· 异源初免打破新疫苗的保护性免疫反应瓶颈
来自不同平台的新guan疫苗在疗效、保护期和副作用方面存在差异。为了最大限度地发挥疫苗接种的效益，科研攻关组疫苗研发专班专家组副组长、中国工程院院士王军志研究团队探索了采用异源的主要增强策略的效用，在小鼠模型中对中国正在进行临床试验的四种主要新guan候选疫苗的不同组合进行了测试。
 
结果表明，腺病毒载体疫苗免疫后，灭活/重组亚单位/mRNA疫苗再免疫，特别能提高水平的中和抗体，并促进调节抗体反应为主要的中和抗体。此外，腺病毒载体疫苗的异源初始增强方案也改善了Th1偏向性T细胞反应。研究结果为研制和应用新guan疫苗控制SARS-CoV-2大流行提供了新的思路。

中国国家食品药品监督管理研究院提供并维持无特异性病原体BALB/c小鼠。本研究中使用的四种SARS-CoV-2疫苗包括灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗和mRNA疫苗，并由不同制造商捐赠。

新鲜分离的脾细胞用跨越SARS CoV-2棘突蛋白的四个肽池以每孔2 × 105个细胞刺激20小时。每种肽的浓度为5μg/mL。收集上清液并根据不同的疫苗接种组或不同的肽池汇集。上清液按1:2的比例稀释，然后使用MSD V-PLEX促炎试剂盒1（MSD 试剂盒：V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit）进行测量。使用标准曲线计算每个样品的浓度。从刺激样品的水平中减去未刺激样品的浓度。

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04 新guan研究单细胞测序基因分析

● BD Rhapsody 单细胞多组学平台

应用单细胞测序探究新guan患者单核细胞免疫学特征

上海优宁维生物科技股份有限公司

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