HY STEMCELL 人间充质干细胞培养基（无血清，临床级）
时间：2017-12-22 阅读：3476
人间充质干细胞培养基已经发展到了第三代：
*代 培养基+牛血清
第二代 培养基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和脐带血清
第三代 无血清、无动物源、成分确定的培养基
第三代人间充质干细胞培养基不含牛血清或人血清之类的血清替代品，无动物源而且成分确定，免除了异种血清带来的病原体污染风险，而且批次稳定，适合干细胞治疗的临床研究。
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基
中文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基
英文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM Human MSCs Growth Medium
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基是成分确定、无血清、无异源物，无需铺板胶的*培养基。适用脐带或脂肪来源的人间充质干细胞的原代培养扩增。培养的hMSC可传多代。
特点
Serum-free 无血清成分
Xeno-free 无动物源
Chemically-defined 化学成分明确
NO plate coating necessary 无须昂贵的铺板蛋白
Perform better than FBS medium 生长分化优于血清培养基
组份
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基包括【Basal Medium 基础培养基】 和 【Supplement Medium 细胞因子添加物】两部分。基础培养基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。细胞因子添加物中含有多种细胞生长因子、粘附蛋白、转铁蛋白、胰岛素、微量元素和人白蛋白等成分。
产品 | 货号 | 规格 | 储存 |
CCGmHuM Human MSCs Medium | HX0201M | 套装 |
|
CCGmHuM Human MSCs Basal Medium | HX0202M | 450mL | 2～8℃ |
CCGmHuM Human MSCs Supplement Medium 10X | HX0203M | 50mL | –20°C |
培养表现
使用HY StemCell CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基培养人脐带间充质干细胞，传到第7代，MSC形态功能维持良好。
应用
适用于原代培养脐带或脂肪组织来源的人间充质干细胞。
培养条件
培养基：*培养基
细胞系：脐带或脂肪组织来源的人间充质干细胞
细胞类型：贴壁
储存
基础培养基保存在2～8℃。细胞因子添加物保存在–20°C。
使用注意
为保障活性，建议把【Supplement Medium 细胞因子添加物】一次解冻后分装再冻存，不宜反复冻融。
订购信息
品牌 | 货号 | 产品描述 | 包装 | 目录价 |
HY StemCell | HX0201M | CCGmHuMTM Human MSCs Medium 人间充质干细胞无血清培养基 | 1 Kit | 3000元 |
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背景知识
2015年国家重新开放干细胞行业政策以来，卫计委等已经发布了多个文件：
《国家重点研发计划干细胞与转化医学重点专项实施方案（征求意见稿）》
目标：凝聚优势力量，重点针对干细胞发生，发育和形成功能细胞过程中的重要科学问题，深入开展干细胞、生物材料、组织工程、生物人工器官，以及干细胞与疾病发生等方面的基础研究、应用基础研究和转化开发。整体提升我国干细胞及其转化医学领域的实力，加快科研成果的应用。
任务：1. 多能干细胞干性维持机制。2. 组织干细胞的获得及功能。3. 干细胞定向分化及细胞转分化机制。4. 干细胞的体内功能与作用机制。5. 基于干细胞的器官再造。6. 干细胞资源库。7. 干细胞临床前评估。8. 干细胞转化与应用。
《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》（试行）（征求意见稿）
提出了适用于各类可能应用到临床的干细胞（除已有规定的造血干细胞移植外）在制备和临床前研究阶段的基本原则。每个具体干细胞制剂的制备和使用过程，必须有严格的标准操作程序并按其执行，以确保干细胞制剂的质量可控性以及治疗的安全性和有效性。
培养基部分摘录：
培养基 干细胞制剂制备所用的培养基成分应有足够的纯度并符合无菌、无致病微生物及内毒素的质量标准,残留的培养基对受者应无不良影响；在满足干细胞正常生长的情况下，不影响干细胞的生物学活性，即干细胞的“干性”及分化能力。在干细胞制剂制备过程中，应尽量避免使用抗生素。
若使用商业来源培养基，应选择有资质的生产商并由其提供培养基的组成成分资料及相关质量合格证明。必要时，应由专业检定机构对每批培养基进行质量检验，并出具检验报告。
除特殊情况外，应尽可能避免在干细胞培养过程中使用人源或动物源性血清，不得使用同种异体人血清或血浆。如必须使用动物血清，应确保其无特定动物源性病毒污染。严禁使用海绵体状脑病流行区来源的牛血清。
若培养基中含有人的血液成份，如白蛋白、转铁蛋白和各种细胞因子等，应明确其来源、批号、质量检定合格报告，并尽量采用国家已批准的可临床应用的产品。
《干细胞临床研究管理办法（试行）》
关于干细胞临床研究的医疗机构的条件与责任、干细胞临床研究的立项与备案、临床研究流程及要求、临床研究报告制度、专家委员会责任和监督管理。
《*干细胞临床研究机构名单》*30家单位
《第二批干细胞临床研究备案机构》次批72家单位 2017年11月
《干细胞通用要求》
该要求围绕干细胞制剂的安全性、有效性及稳定性等关键问题，建立了干细胞的供者筛查、组织采集、细胞分离、培养、冻存、复苏、运输及检测等的通用要求
可见，干细胞治疗的临床研究正在标准规范化。使用无血清培养基更加安全，监管要求更少。
一 人间充质干细胞培养基的发展
人间充质干细胞的来源
从1970年发现以来，脂肪组织、胎盘、牙髓、滑膜、外周血、牙周韧带、子宫内膜、脐带和脐带血中都有研究发现间充质干细胞[1]，不过应用比较多的来源还是骨髓、脂肪和脐带组织中的间充质干细胞[2]。目前，异体间充质干细胞密度zui高来源是脐带，每毫升zui高能获得470万个MSC，而自体间充质干细胞密度zui高来源是脂肪组织，每毫升zui高能获得155万个MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基就是适用脐带和脂肪组织来源的hMSC培养。
图源网络：脐带和华通氏胶
人间充质干细胞的培养发展[4]
人间充质干细胞的下游应用是组织修复等疾病治疗，因此它的培养要满足医用的高标准。随着临床应用的成熟，间充质干细胞培养基也经历了从有血清到无血清培养基的转变。
有血清培养基一开始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然产品，批次间差异大，影响实验稳定性，尤其还是异源物，会有病原体污染风险和免疫影响，不利治疗安全，需要额外监管。于是越来越多的血清培养基选择了自体或同源异体的人源血清作为培养基添加物，包括人血清、血小板裂解液和脐带血清。
低血清或人源血清仍然不够稳定，也不能*免除病原体的污染风险，随之兴起的是成分确定的无血清培养基。无血清培养基用重组人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此来消灭异种蛋白输入人体可能会引起的免疫抗体反应。比如血清中zui基础的白蛋白、转铁蛋白和胰岛素，无血清培养基都改用重组人转铁蛋白和重组人胰岛素代替，而不是提取天然产物。无血清培养基发展中，确定了多种生长因子是人间充质干细胞扩增必须添加的。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基细胞因子添加物中含有多种细胞生长因子、粘附蛋白、转铁蛋白、胰岛素、微量元素和人白蛋白等成分。
二 人类间充质干细胞的分离与原代培养方法[5]
新生儿脐带间充质干细胞分离与原代培养
新生儿脐带组织剥取华通氏胶，以组织块培养法或酶消化法分离新生儿间充质干细胞，
贴壁法做原代培养。
新生儿脐带血来源间充质干细胞分离与原代培养
新生儿脐带血样本，与磷酸缓冲液 1:1 稀释后，以密度梯度离心法分离单个核细胞，贴壁法培养。定期更换培养基直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合。
新生儿胎盘间充质干细胞分离与原代培养
剥取胎盘羊膜、绒毛膜或绒毛组织，以酶消化法分离胎盘间充质干细胞，贴壁法做原代培养。
人类脂肪间充质干细胞分离与原代培养
成人脂肪组织，以酶消化法分离脂肪间充质干细胞，贴壁法做原代培养。
人类牙髓间充质干细胞分离与原代培养
牙齿样本，完整剥离牙髓，以酶消化法分离牙髓间充质干细胞，贴壁法做原代培养。
人类骨髓间充质干细胞分离与原代培养
人骨髓液样本，以密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞，贴壁法作原代培养。
人类宫内膜间充质干细胞分离与原代培养
宫内膜组织样本以酶消化法分离子宫内膜干细胞，并做原代培养。或
人羊水来源间充质干细胞分离与原代培养
人羊水样本，100 目滤器过滤后离心，弃上清。以培养液重悬细胞沉淀，贴壁法培养。
定期更换培养基直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合。
人类母乳来源间充质干细胞分离与原代培养
人类母乳样本，100 目滤器过滤后离心，弃上清。以培养液重悬细胞沉淀，贴壁法培养。定期更换培养基直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合。
人类滑膜来源间充质干细胞分离与原代培养
人类滑膜组织样本，以酶消化法分离滑膜间充质干细胞。离心洗涤后，贴壁法培养。定期更换培养基直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合。
参考文献
1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.
2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.
3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.
4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.
5 SZDB/Z 126 2015《人类间充质干细胞库建设与管理规范》
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