1. 农残试剂配置

缓冲溶液：取一包缓冲剂，加入500ml蒸馏水，溶解搅拌均匀，密闭、避光、阴凉处保存。

显色剂：取显色剂一瓶，加入15ml缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。

底物：取底物一瓶，加入15ml蒸馏水溶解，4℃冰箱中保存。

乙酰胆碱酯酶：取乙酰胆碱酯酶一瓶，用3ml缓冲溶液溶解， 4℃冰箱中保存。

注：因农残试剂生产厂家众多，使用时请以试剂说明书为准！

2. 样品处理

选取有代表性的蔬菜样品，擦掉样品表面泥土，剪成1cm见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5ml缓冲溶液，振荡1min～2min，倒出提取液，静置3min～5min，待用。

注意：样品不可用水冲洗，应擦去表面泥土等杂物后取样。为了保证取样具有代表性，叶菜一般取来自不同植株叶片的叶尖部样本，果菜从不同个体的表皮处取样。

3. 对照溶液测试

在提取瓶中加入2.5ml缓冲溶液，再加入100ul酶液、100ul显色剂，摇匀后于37℃放置15分钟(每批样品的控制时间必须一致)。15分钟后再加入100μL底物摇匀,此时检液开始显色反应,应立即倒入1cm比色皿，放入仪器比色池中，将仪器调到测量界面,按操作指示面板按键区的“对照”按钮，仪器开始做对照。3分钟后仪器自动对照完成，对照完成后将对照样取出，保持仪器界面不变。

注意：对照测试必须在*通道进行，对照测试△A应＞0.3，若对照测试的结果小于以上数值时，仪器会自动提示“对照错误”，须重新做对照，以保证测量结果的准确性。(对照测试△A<0.3的原因：一是酶的活性不够，二是反应温度太低。)

4. 样品溶液测试

另取干净的提取瓶，放入2.5ml样品提取液，加入100ul酶液、100ul显色剂，摇匀后于37℃放置15分钟(放置的时间与对照液放置的时间必须一致)。15分钟后再加入100μL底物摇匀,此时检液开始显色反应,应立即倒入1cm比色皿，放入仪器比色池中，按操作指示面板按键区的“测量”按钮开始测量，3分钟后仪器测量完成，显示测量结果。结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示，当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果，阳性结果的样品需要重复检验2次以上。

对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。

5. 说明

葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。

甲醛检测方法

1. 试剂配置

甲醛试剂（一）

甲醛试剂（二）： 将甲醛试剂（二）①加少量热水溶解，再加入甲醛试剂（二）②，冷却后定容于50ml容量瓶

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！甲醛试剂（一）有腐蚀性；配制好的甲醛试剂（二）可使用一个月。

2. 样品处理

准确称取0.2g样品放入哈希管中，加入5滴甲醛试剂（一）和10ml蒸馏水，混匀后盖紧瓶盖，放入沸水中加热5min，取出冷却至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤，以除去悬浮颗粒，此为待测溶液。

3. 空白

取蒸馏水10ml于10ml比色管中，加入甲醛试剂（二）1 ml，混合均匀，放入恒温水浴锅中50℃加热15分钟，取出冷却至室温，移入1cm比色皿中，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4. 测量

移取处理好的样品溶液5ml于10ml比色管中，加入蒸馏水定容至10ml，然后再加入甲醛试剂（二）1 ml，混合均匀，放入恒温水浴锅中50℃加热15分钟，取出冷却至室温，移入1 cm比色皿中，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中甲醛浓度值X（mg/kg）。

吊白块检测方法

1. 试剂配置

吊白块试剂（一）

吊白块试剂（二）：将吊白块试剂（二）①加少量热水溶解，再加入吊白块试剂（二）②，冷却后定容于50ml容量瓶

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！吊白块试剂（一）有腐蚀性；配制好的吊白块试剂（二）可使用一个月。

2. 样品处理

准确称取0.2g样品放入哈希管中，加入5滴吊白块试剂（一）和10ml蒸馏水，混匀后盖紧瓶盖，放入沸水中加热5min，取出冷却至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤，以除去悬浮颗粒,此为待测溶液。

3. 空白

取10ml蒸馏水于10ml比色管中，加入吊白块试剂（二）1 ml，混合均匀，放入恒温水浴锅中50℃加热15分钟，取出冷却至室温，移入1cm比色皿中，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4. 测量

移取处理好的样品溶液5ml于10ml比色管中，加入蒸馏水定容至10ml，然后再加入吊白块试剂（二）1 ml，混匀后放入恒温水浴锅中50℃加热15分钟，取出冷却至室温，移入1 cm比色皿中，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中吊白块浓度值X（mg/kg）。

双氧水检测方法

1. 试剂配置

     双氧水试剂（一）

     双氧水试剂（二）

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！双氧水试剂（一）有腐蚀性，双氧水试剂（二）有毒。

2. 样品处理

准确称取1.0g样品放入哈希管中，加2ml双氧水试剂（一）和6ml蒸馏水，混匀后盖紧瓶盖，放入恒温水浴锅50℃下加热10min，取出冷却至室温，用0.45μm 微孔滤膜过滤，滤液移入10ml比色管中，加0.2ml双氧水试剂（二），再加蒸馏水至10ml刻度，此为待测溶液。

3. 空白

向比色管中加入2ml双氧水试剂（一）和0.2ml双氧水试剂（二），再加蒸馏水至10ml刻度，混匀，转入1cm比色皿，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4. 测量

 向待测液中加入2ml双氧水试剂（一）和0.2ml双氧水试剂（二），再加蒸馏水至10ml刻度，摇匀，转入1cm比色皿中，放入仪器比色池中进行测量，测量完成后，仪器会自动显示样品浓度结果X（mg/kg）。

亚硝酸盐检测方法

1.试剂配置

亚硝酸盐试剂（一）：加少量热蒸馏水溶解，冷却后定容于50mL容量瓶。

亚硝酸盐试剂（二）：加蒸馏水溶解，定容于50mL容量瓶。

亚硝酸盐试剂（三）： 将两种亚硝酸盐试剂（三）溶于少量热水中，冷却后定容于50ml容量瓶。

亚硝酸盐试剂（四）：将亚硝酸盐试剂（四）①加亚硝酸试剂（四）②定容于100mL棕色容量瓶，避光保存。

亚硝酸盐试剂（五）：加蒸馏水溶解，定容于100mL棕色容量瓶，避光保存。

注意：除试剂（一）需常温保存外所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！亚硝酸盐试剂（一）容易析出，请用50℃左右水浴加热1分钟后使用。配制好的亚硝酸盐试剂（五）有腐蚀性，可放置一个月左右，溶液变绿后不能使用。

2.样品处理

准确称取0.1g经搅碎混匀的试样，置于哈希管中，加入1mL亚硝酸盐试剂（一）和5mL的蒸馏水，密闭后于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，然后一面转动一面加入1mL亚硝酸盐试剂（二），摇匀，再加入1mL亚硝酸盐试剂（三），以沉淀蛋白质。加水至10ml刻度，摇匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，余液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液备用。

3.对照测试

取5ml蒸馏水于10ml比色管中，加入0.1mL亚硝酸盐试剂（四），混匀，放置5min后加入0.2ml试剂（五），混匀，静置15分钟，转入1cm比色皿，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4.样品测定

取5ml待测溶液于10ml比色管中，加入0.1亚硝酸盐试剂（四）混匀，放置5min后加入0.2ml试剂（五），混匀，静置15分钟，转入1cm比色皿，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中亚硝酸盐浓度值X（mg/kg）。

六价铬检测方法

1.试剂配置

    六价铬试剂（一）：加蒸馏水稀释，定容于100mL容量瓶

    六价铬试剂（二）：加蒸馏水稀释，定容于100mL容量瓶 

六价铬试剂（三）：加蒸馏水稀释，定容于100mL容量瓶

六价铬试剂（四）：加蒸馏水稀释，定容于100mL容量瓶

六价铬试剂（五）：将六价铬试剂（五）①溶解于六价铬试剂（五）②中，加水稀释至100ml，储存于棕色瓶中置冰箱内保存。

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！六价铬试剂（一）、六价铬试剂（二）、六价铬试剂（三）、六价铬试剂（四）有腐蚀性；当配制好的六价铬试剂（五）溶液色变深后不能使用。

2.样品处理

操作步骤

① 将待测的粮食、蔬菜、水果类样品洗净晾干，碾碎，混匀备用。禽蛋、水产等洗净、晾干，取可食部分，混匀备用。

② 取经过预处理的均匀样品1.000g于哈希管中（敞开），加入2.0mL试剂（一）纯硝酸，4.0mL试剂（二）过氧化氢溶液，轻轻摇匀，放入亚临界水萃取仪中，从温度升到140℃时开始计时，保持恒温lh，同时做试剂空白，取出哈希管待自然冷却后，将消解液移入l0mL比色管中，将哈希管用水洗净，合并洗液于比色管中，用水稀释至10ml刻度，混匀、待测。

3.对照测试

取10ml蒸馏水于10ml比色管中，向比色管内加入0.1ml六价铬试剂（三）和六价铬试剂（四），混匀，再加入0.4ml试剂（五）摇匀，放置10min后，转入1cm比色皿，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4.样品测定

取待测溶液，加蒸馏水稀释至刻度，再向比色管内加入0.1ml六价铬试剂（三）和六价铬试剂（四），混匀，再加入0.4ml试剂（五）摇匀，放置10min后，转入1cm比色皿，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中六价铬浓度值X（mg/kg）。

重金属检测方法

1.试剂配置

    重金属试剂（一）

    重金属试剂（二）

重金属试剂（三）：加少量蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶

重金属试剂（四）：加少量蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！重金属试剂（一）、 重金属试剂（二）有腐蚀性。

2.样品处理

操作步骤

③ 将待测的粮食、蔬菜、水果类样品洗净晾干，碾碎，混匀备用。禽蛋、水产等洗净、晾干，取可食部分，混匀备用。

④ 取经过预处理的均匀样品1.0g于哈希管中，加入2mL重金属试剂（一），2mL重金属试剂（二），4ml蒸馏水，轻轻摇匀，盖紧上盖，放入超声波提取仪中提取10分钟，取出哈希管待自然冷却后，打开上盖，过滤将溶液移入10ml比色管中，加重金属试剂（四）调节溶液PH=9，加水至刻度，此为待测溶液。

3.对照测试

取10ml蒸馏水于比色管内，加入1ml重金属试剂（三），混匀，放置10min后，转入1cm比色皿，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4.样品测定

取待测溶液，加蒸馏水稀释至刻度，再向比色管内中加入1ml重金属试剂（三），混匀，放置10min后，转入1cm比色皿，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中重金属浓度值X（mg/kg）。

二氧化硫检测方法

1. 试剂配置

     二氧化硫试剂（一）：加蒸馏水溶解，定容于500ml容量瓶

     二氧化硫试剂（二）：加蒸馏水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫试剂（三）

     二氧化硫试剂（四）：加蒸馏水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫试剂（五）：将两种二氧化硫试剂（五）混合，用热水溶解，冷却后定容于50ml容量瓶

     二氧化硫试剂（六）：将二氧化硫试剂（六）①溶解定容于50ml容量瓶中，取出20ml于100ml容量瓶中，滴加二氧化硫试剂（六）②混匀使溶液由红变黄，加水至刻度

     二氧化硫试剂（七）：加蒸馏水溶解，定容于50ml容量瓶

     二氧化硫试剂（八）

注意：所有试剂均需避光、低温（冰箱4℃）保存！二氧化硫试剂（一）有毒，二氧化硫试剂（七）、二氧化硫试剂（八）有腐蚀性。

2. 样品处理

2.1  水溶性固体样如白砂糖称取1.0g，用少量水溶解，置于10ml比色管中，加入0.4ml二氧化硫试剂（七），5分钟后加入0.4ml二氧化硫试剂（八），然后加入2ml二氧化硫试剂（一），加水至刻度，混匀，此为待测溶液。

2.2  其他固体样如饼干、粉丝称取1.0g研磨均匀的试样，以少量水润湿并移入10ml比色管中，加入2ml二氧化硫试剂（一），浸泡4小时以上，若上层溶液不澄清可加入二氧化硫试剂（四）及二氧化硫试剂（五）各0.25ml，混匀，过滤，加水至刻度，此为待测溶液。

2.3  液体试样如葡萄酒可直接吸取1mL，置于10ml比色管中，用少量水稀释，加入2ml二氧化硫试剂（一），摇匀，zui后加水至刻度，混匀，此为待测溶液。

3. 空白

取一支干净的10mL比色管，准确加入二氧化硫试剂（一）10ml， 1ml二氧化硫试剂（二），1ml二氧化硫试剂（三）及1ml二氧化硫试剂（六），混匀，放置20分钟后，转入1cm比色皿，放入仪器相应比色池中，按操作指示面板区的“对照”键进行对照，对照完成后，仪器会自动记录对照结果，并在显示屏下方显示为“对照测量完成”。

4. 测量

取待测溶液5ml于10mL比色管中，加入二氧化硫试剂（一）至10ml刻度，再加入1ml二氧化硫试剂（二），1ml二氧化硫试剂（三）及1ml二氧化硫试剂（六），混匀，放置20分钟后，转入1cm比色皿，放入已经做过对照的仪器通道中按操作提示面板区的“测量”键进行测量，测量完成后，仪器自动显示样品中二氧化硫浓度值X（mg/kg）。

备注：本仪器在室温20°左右测量zui准确。

附录1  常见故障及原因

如果操作不当，相应的会出现下列出错提示信息。都可按

取消返回。

下表中若未说明生产问题的原因，则与错误提示信息相同。

附录2  各物质*

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