ibidi活细胞培养，共聚焦成像
时间：2023-08-24 阅读：888
1.一体化小室——细胞培养&显微成像两用玻片/培养皿
细胞免疫荧光实验您是怎么做的？
还在用小玻片，先泡酸、再晾干、再coating、再种细胞、染色、最后封片成像？
那您太out了吧！
使用德国ibidi产品，先养细胞、然后直接固定、染色、成像，在培养皿/玻片上全部搞定！不仅能帮您把细胞养好、还能帮您省时省力的获得漂亮的成像结果（见图1）！
图1. 传统爬片方法（左）与ibidi 产品免疫荧光实验（右）的比较
2.ibidi产品底部媲美盖玻片厚度，为高分辨率显微成像而设计的光学特性
德国ibidi公司研发的μ-Slide与μ-Dish系列产品，与一般市面上常见的细胞培养皿不同，其底部是由polymer塑料制成，具有与玻璃材质媲美的高光学穿透与低背景荧光等特性。相较于一般细胞培养产品（图2左），ibidi产品（图2右）底部构造厚度符合标准盖玻片厚度（180 μm），用高倍镜物镜观察，可以使焦距集中在待测样本上，产生良好的成像结果。
图2. ibidi细胞培养产品底部媲美盖玻片厚度
3.ibidi产品底部化学耐受性强，适用于多种常用的细胞固定剂（见图3）
图3.ibidi产品底部适用的溶剂列表
4. 多种多样的细胞培养表面
细胞进行生长、发育和信号传递很大程度上取决于细胞容器的表面处理方式。
ibidi 产品底部相比于普通培养皿更加平滑（见图4）。目前，ibidi产品μ-Slides和μ-Dishes有标准底、玻璃底以及多种底部预包被的产品，适用于培养不同的细胞类型，不同底之间的比较（见图5）。
ibidi标准底具有亲水超薄的特性，该底部的光学特性符合多种成像技术的要求，如相差、共聚焦和双光子显微成像。
ibiTreat，作为ibidi的表面处理方式，通过了大量不同细胞系和原代细胞培养测试，且已发表的30000多篇使用了ibidi产品的期刊论文中，超过90%使用了ibiTreat，表明大多数细胞在ibiTreat下生长良好，无需进行额外的表面处理。ibiTreat是一种物理修饰的表面处理方式，让耗材表面亲水，利于绝大多数种类的细胞贴壁，可与其他标准细胞培养瓶和培养皿相媲美。
图4. AFM（原子力显微技术）测量表面粗糙度。ibidi产品（右下）比普通培养皿具有更平滑的底部构造，更加的成像效果。
ibidi标准底也有疏水、无包被的表面可以选择。可以根据具体的实验需求，进行特定的包被，或者直接用来培养非贴壁细胞。
ibidi也有玻璃底的产品。玻璃底可以直接培养细胞，但可能需要进行表面处理来促进细胞更好的贴壁。ibidi研发的玻璃底产品尤其适用于TIRF、单光子及单分子应用。
图5. ibidi标准底与ibidi玻璃底
基于以上特殊的底部构造，ibidi μ-Dish，μ-Slide以及μ-plate等产品都既适用于常规细胞培养，又可以简化免疫荧光实验步骤、节约实验时间，并且获得显微成像效果。
ibidi μ-Dishes产品可以进行常规的细胞培养、转染、免疫荧光实验以及高分辨率显微成像。目前ibidi μ-Dishes主要包括35mm（高壁和低壁）（见图6）。35mm低壁的产品更适合于在显微镜下对细胞进行操作，如进行电生理膜片钳记录细胞，或者吸取单细胞进行单细胞基因组测序等实验。
图6. ibidi μ-Dish系列产品：35mm高壁VS低壁
ibidi μ-Dishes另外一个精巧的设计是带锁的盖子（见图7）。当盖子处于lock位置，减小蒸发的影响，因而可以在非湿润环境中进行长时程的细胞实验，如需要在培养箱外，显微镜下进行长时程的活细胞观察实验。由于Dish特殊的气体通透特性，在细胞培养期间气体交换（C02，O2）是并不受lock位置影响的。
图7.带锁的培养皿设计
μ-Slides well系列产品：μ-Slides 2 well，4 well，8well
如果您希望同时获得多个样品的显微成像结果，如比较同种细胞加入不同药物刺激的形态变化，或者实验初期用来筛选好用的抗体及摸索最佳抗体浓度等实验，推荐使用μ-Slides well系列产品（见图8）。不同大小的开放小室适用于不同量的细胞培养。其底部也是ibidi标准底处理，满足细胞培养、免疫荧光实验、高分辨率显微成像的需求。
图8. μ-Slides well系列产品：μ-Slides 2 well，4 well，8well，18well
在此基础上，如果需要进行更佳的显微镜成像实验，如进行实时的活细胞不同位点的扫描，μ-Slides well ph+系列产品更适合您。在传统的μ-Slides well的孔的中间，ph+产品加了一层特殊的平板（见图9），这层平板可以有效避免开放小室中影响相差成像效果的凹液面的形成。在这层平板与well的四周有缝隙，方便向其中加入细胞及换液等操作。
图9. μ-Slides well 与 μ-Slides well ph+ 产品以及成像对比图。左图. 产品对比图，ph+在中间有特殊的平板，四周有孔洞，方便铺细胞及换液等操作。右图. ph+有效防止凹液面形成（右侧），整个视野都有良好的相差成像效果。
以上产品还有底部带网格的（见图10），如35 mm Dish Grid-500 & Grid-50，μ-Slides 8 well Grid-500。可应用于细胞及细胞团的重定位，特定区域发生事件的数目如细胞转染效率的统计，细胞运动距离的参考，对单个细胞进行显微注射或者追踪轴突的生长等。同样这些产品具备ibidi标准底设计，适用于高分辨率的显微成像。
图10. 带网格产品的底部网格图示
一体化小室产品还包括μ-Slide channel 系列产品（图11A），这类产品有通道式的细胞培养空间，同样具有ibidi标准底，适合于高分辨率显微成像。产品两端有鲁尔接头，可应用于流体剪切力实验，即在培养基流动状态下就行细胞培养。
在开放小室中铺细胞时，通常依赖于人为晃动操作，对于新手尤其容易使细胞聚团，导致细胞分布不均（图11C）。而通道式的设计，巧妙回避这一问题，只需要向通道中加入细胞悬液，无需晃动（图11B），轻松使细胞在通道中均匀分布（图11D）。另外当需要进行精确的少量试剂换液时，或者试剂、抗体珍贵，μ-Slide channel 系列产品将是好的选择。
图11. μ-Slide channel 系列产品。A. μ-Slide I及μ-Slide IV产品图示。B. μ-Slide I为例说明系列产品适用步骤，向通道中加入100 ul细胞悬液，向一侧储液池中加入无细胞的培养液，向另一侧储液池中加入无细胞的培养液，置于培养箱中培养。C. 开放小室的细胞分布，依赖于晃动操作，经常会分布不均匀。D. channel中细胞的分布，由于其集合设计，使细胞非常容易的均匀分布在通道中。
考虑到有些用户希望保存标本，ibidi公司还开发了removable的硅胶培养室（图12左），用于细胞培养和显微成像。将硅胶材料移除后，可以封片进行保存。
另外，ibidi公司还开发了Sticky的well及通道（图12右）。这类产品通用性强，可与多种多样的底部材料粘贴。而且对于不易放入通道培养的细胞、组织等，可以选择先放在底部材料上，再将培养通道粘贴到其上进行实验。
图12. Removable & Sticky系列产品。图左. 3/8/12 Well Chamber, removable；图右. sticky-Slide 8 well、sticky-Slide I Luer、sticky-Slide VI 0.4。
易必迪ibidi公司专注于细胞培养及功能实验的耗材及仪器开发，产品设计巧妙，适用于各种各样的实验需求，简化实验步骤，节约实验时间。如果您也在培养细胞，也在做细胞免疫荧光实验，也在做细胞功能实验，那么快来试试ibidi系列产品吧，绝对让您实验变得轻松简单，事半功倍！