去磷酸化指的是水解去除磷酸(PO43−)基团的过程。在对蛋白质或DNA去磷酸化时，需要使用酶或水解酶切割酯键。例如，磷酸酶可将磷酸单酯水解为磷酸根离子和带有游离羟基(OH)基团的分子，从而去除磷酸基团。 默提供各类生命科学解决方案和服务

1.利用小牛肠碱性磷酸酶对DNA进行去磷酸化

材料

牛小肠碱性磷酸酶（货号 P4978）
10X CIP缓冲液（货号C3225）
1 M NaCl
0.5 M Tris-HCl，25 °C下pH 7.9
0.1 M MgCl2
0.01 M 二硫苏糖醇

存储缓冲液

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl2
0.1 mM ZnCl2
50%甘油

操作流程：

1. 1X CIP缓冲液溶解DNA(0.5 µg DNA/10 µL)。

2. 对于5’突出的粘末端DNA加入0.1单位/皮摩尔的CIP；对于3'突出的粘末端或布路姆试剂加入1单位/皮摩尔。

3. 在37℃孵育60分钟。

4. 苯酚/氯仿2（货号P3803 或P2069）提取或凝胶纯化DNA。*

5. 乙醇沉淀法恢复DNA。2

*注意：苯酚提取或凝胶纯化后无需再热灭活。

热灭活：对于牛肠酶，在5毫摩尔/升的乙二胺四乙酸下，加热至75℃10分钟，可使95%以上的活性失活。 注意：大肠杆菌的碱性磷酸酶比牛肠酶在高温下更稳定，也更耐热灭活。