rProtein A Beads

北京索莱宝科技有限公司 

：

货号：R8290

规格：5ml

保存：2-8℃

产品介绍：

Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc 片段结合哺乳动物IgG，但是不与狗lgG 结合，不结合人lgM、lgD 和IgA。蛋白A与蛋白G不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样，具体见表。天然Protein A有五个IgG 结合区域和一些未知功能的区域，重组protein A去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五个IgG结合区域，减少了非特异性吸附。

rProtein A Beads 产品性能：

ProteinA和ProteinG对不同抗体的结合能力：

++++=结合能力强；++=结合能力中等；—=结合能力弱或没有结合

纯化流程：

1、Buffer 的准备 

所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

结合/ 洗杂Buffer: 0.15MNaCl，20mMNa2HPO4，pH7.0

洗脱Buffer: 0.1M甘氨酸，pH3.0

中和液： 1MTris-HCl，pH8.5

2、样品准备 

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。 

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3、样品纯化 

1)将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2)将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保证目的蛋白与rProtein A Beads 充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

4、SDS-PAGE检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

填料清洗 

rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质

 用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%TritonX-100清洗，然后然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。

问题及解决方案