Streptavidin链霉亲和素的标记方式
时间：2017-07-12 阅读：1491
Streptavidin链霉亲和素的标记：
Streptavidin链霉亲和素因表面所带正电荷少，且不含糖基，在实验中的非特异性结合远低于亲和素，因此目前以链霉亲和素标记的酶结合物更为常用。
1.HRP-SA结合物的制备
采用过碘酸钠直接标记：反应在4℃进行，先在HRP中加入NaIO4，然后直接加链霉亲和素溶液混匀，再用碳酸盐缓冲液（PH 9.0）透析后，用KBH4终止反应：加饱和硫酸铵沉淀，离心后弃上清液，再用PBS复溶沉淀即得HRP-SA结合物．
2.SA－生物素化HRP复合物的制备
按BNHS标记抗体法制备生物素化HRP（HRP-B），再将HRP-B适当稀释后，加入等体积的Streptavidin链霉亲和素溶液（HRP-B与SA浓度比约1/4）反应，即可制得SA－生物素化酶复合物。
3.AP-SA结合物的制备
采用戊二醛二步法：先用饱和硫酸铵沉淀碱性磷酸酶，离心后加过量戊二醛溶液复溶碱性磷酸酶沉诧．戊二醛的一个醛基即与碱性磷酸醇的氨基结合：充分透析除去未结合戊二醛后，加链霉亲和素与结合了碱性磷酸酶的戊二醛另一个醛基结合，用赖氨酸终止反应，离心后留取含AP-SA结合物上清液备用。