酵母选择营养缺陷型培养基Yeast selective media

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酵母选择性营养缺陷型培养基

一、选择性营养缺陷型酵母培养基SD培养基(Synthetic Dropout Media)SC-Droupout

酵母缺陷培养基种类：一缺培养基单缺培养基/二缺培养基双缺培养基/三缺培养基/四缺培养基/五缺培养基

(1)    一缺培养基：以SD-Ura(Sc-Ura培养基)为代表的此类酵母SC选择培养基或SD缺陷培养基主要用于单质粒酵母转化筛选

用途：外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化

SD/-Trp， SD/-Leu， SD/-His， SD/-Ura， SD/-Met， SD/-Ade

SC-Trp，SC-Leu， SC-His， SC-Ura， SC-Met， SC-Ade

(2)    二缺培养基：此类酵母SC选择培养基－SD培养基用于双质粒酵母转化筛选

用途：外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化

免疫共沉淀（Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配实验、接合型二倍体筛选

SD/-Trp-Leu，SD/-Trp-His，SD/-Trp-Ade，SD/-Leu-Ade，SD/-His-Ade， SD/-Leu-His， SD/-Ura-Trp， SD/-Ura-Leu，SD/-Ura -His

SC-Trp-Leu， SC-Trp-His， SC-Trp-Ade， SC-Leu-Ade， SC-His-Ade， SC-Leu-His， SC-Ura-Trp， SC-Ura-Leu，SC -Ura-His

(3)    三缺培养基：此类酵母SC选择培养基－SD培养基用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测

用途：外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统报告基因检测

Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析（His3，Ade2)

SD/-Trp-Leu-His ，SD/-Trp-Leu-Ade， SD/-Ura-Trp-His， SD/-Ura-Leu-His，SD/-Trp-His-Ade， SD/-Ura-Trp-Leu

SC-Trp-Leu-His ，SC-Trp-Leu-Ade， SC-Ura-Trp-His， SC-Ura-Leu-His，SC-Trp-His-Ade， SC-Ura-Trp-Leu

(4)    四缺培养基：此类酵母SC选择培养基－SD培养基主要用于报告基因分析

用途：酵母双杂交系统和酵母三杂交系统报告基因检测 、Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3，Ade2)

SD/-Trp-Leu-His-Ade， SD/-Ura-Trp-Leu-His， SD/-Ura-Trp-Leu-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade， SC-Ura-Trp-Leu-His， SC-Ura-Trp-Leu-Met

(5)    五缺培养基：此类酵母SC选择培养基－SD培养基主要用于报告基因分析和表型分析

用途：酵母三杂交系统报告基因检测(His3，Ade2)、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析

SD/-Trp-Leu-His-Ade-Met， SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade，SD/-Ura-Trp-Leu-His-Met，SD/-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SD/-Ura-Leu-His-Ade-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade-Met， SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade，SC-Ura-Trp-Leu-His-Met，SC-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SC-Ura-Leu-His-Ade-Met

(6)    六缺培养基：此类酵母SC选择培养基－SD培养基主要用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析

用途：酵母三杂交系统报告基因检测、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析

SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met， SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met

上述培养基称为选择性营养缺陷型酵母培养基，主要用于酵母质粒转化筛选，故又称为酵母选择培养基。

培养基配制方法注意事项：

1: 上述培养基含有各种所需成分(葡萄糖除外，因为有些研究者需要用其他糖类如用半乳糖诱导GAL1启动子表达)，为各种氨基酸和酵母含氮碱/酵母氮源的精细混合物干粉，按照8g/L称取，加水后即可配制成相应的培养液， 无需再购置添加Minimal SD Base或其他酵母氮源成分。高压灭菌后加无菌葡萄糖至终浓度为2％(或棉子糖)或实验所需的特定诱导物(如半乳糖用于GAL1启动子诱导表达的剂量或浓度为2%)即可，适用于外源基因在酵母中的表达，酵母单杂交(yeast one-Hybrid)和酵母双杂交(yeast two-Hybrid)系统等的选择缺陷型培养，筛选含特定标志基因的酵母表型。

2: 在配制酵母缺陷培养基时，可以先加入葡萄糖后再高压，对酵母的生长不会产生严重影响。但如加入葡萄糖后再高压消毒则培养基会变色，由浅黄到深褐色不等，对细胞的生长还是有一定影响的（但在一般情况下不会影响实验）。FunGenome suggestion: 由于氨基酸和葡萄糖在高温高压下可起化学反应，因此技术部不建议将葡萄糖加入后高压，而建议用上述提示1的方法配制。

3: FunGenome suggestion : 棉子糖和半乳糖原则上是不能高温高压的，因为在高温高压下其化学结构会发生变化从而对诱导效果产生抑止，这一点特别提醒研究者务必注意，尤其是在做表达调节介导的功能互补实验时至关重要！

4：制备平皿即软琼脂半固体培养基（琼脂粉按2％即每100ml加2克琼脂粉）用于转化筛选时，高压前需要将pH调至6.0左右（为方便起见，pH范围可在5.6-6.5之间变化），而液体培养基则不需要调pH。