索莱宝台盼蓝染色法的原理及操作步骤
时间:2016-01-05 阅读:6523
台盼蓝染液是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以检测细胞是否存活。
台盼蓝染色法的原理
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较的定量。
台盼蓝染色法的操作步骤
材料:
1、显微镜、玻片、盖玻片、滴管;
2、试剂:0.4%台盼蓝染液;
3、台盼蓝(Trypan blue):0.4g;
4、生理盐水:100ml;
操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
(细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。)
台盼蓝染色法注意事项:
1、染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使监测结果偏低。
2、另可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。
3、有潜在致癌危险,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京索莱宝科技有限公司为生化试剂供应商,专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。台盼蓝染色液为索莱宝的自产产品,其货号为C0040。台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝,是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性与细胞的存活率,是组织和细胞培养中常用的死细胞鉴定染色方法之一。