1、待灭菌的物品放置不宜过紧；
2、必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；
3、灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降与大气压相等后才可开盖；
4、电镀零件和表面饰漆，应经常保持清洁，如长期不使用，应在电镀零件上涂中性油脂或凡士林，以防腐蚀，灭菌箱外面套好塑料薄膜防尘罩将灭菌箱放在干燥室内，以免温度控制器受潮损坏。
5、箱内外壳必须有效接地，使用完毕后应将电源关闭。
6、灭菌箱应放置在具有良好通风条件的室内，在其周围有可放置易燃易爆的物品。
7、灭菌箱无防爆装置，不得放置易燃易爆物品。
8、箱内物品放置切勿过挤，必须留出空间，以利热空气循环和消毒。
                            操作方法

1、加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
2、用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气*排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力所需时间。本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。
3、灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
4、将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。