一、 测量原理                

分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc（a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，比例系数用ε表示，则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L·mol-1·cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。T(透光率)=I/I0A(吸光度)= -lgT或A=K·C·L(比色皿的厚度)测定时，入射光I,吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，即“K”为常数。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。        《分光光度计的表头上，一行是透光率，一行是吸光度。》       

二、 722型分光光度计的使用        

1、将灵敏度旋钮调“1”档（信号放大倍率小）。        

2、开启电源，指示灯亮 ，选择开关置于“T”，波长调到测试用波长。仪器预热20分钟。          

3、打开试样室（光门自动关闭），调节透光率零点旋钮，使数字显示为000.0。（调节100%T旋钮），盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0，则可适当增加微电流放大的倍数。（增加灵敏度的档数同时应重复（3）调节仪器透光率的“0”位）但尽量使倍率置于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。         

4、预热后，按（3）连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位置，待稳定后仪器可进行测定工作。      

三、 吸光度“A”的测量        

将选择开关置于A 。调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为零，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。       

四、 浓度c的测量        

将选择开关由“A”旋“C”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓度值。     

注意事项：       

1、测量完毕，速将暗盒盖打开，关闭电源开关，将灵敏度旋钮调低档，取出比色皿，将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内，关上盖子，将比色皿中的溶液倒入烧杯中，用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。

2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。 

使用方法  

（1）预热仪器  将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。  

（2）选定波长  根据实验要求，转动波长手轮，调所需要的单色波长。  

（3）固定灵敏度档  在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下，尽可能采用灵敏度较低的挡，使用时，先调到“1”挡，灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改变灵敏度后，须重新校正“0%”和“100%”。选好的灵敏度，实验过程中不要再变动。  

（4）调节T=0%  轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”，（此时试样室是打开的）。  

（5）调节T=100%  将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。  

（6）吸光度的测定  将选择开关置于“A”，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。   重复上述测定操作1-2次，读取相应的吸光度值，取平均值。  

（7）浓度的测定  选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的浓度值。  

（8）关机  实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。