人细胞角蛋白20试剂盒

人细胞角蛋白20试剂盒——依托复旦大学，集研发、销售、实验室技术服务的产品涉及分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域。

产品简介:"专业经营进口胎牛血清、细胞因子、ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高， 代做ELISA实验等。"

供应商 :拜力生物

货期 :7-10天

1.  试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。

5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

◇      液体类标本:标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。

◇      血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

◇      血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

◇      尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

◇      细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

【生物分子】 抗生素/抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药物结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇激素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素
【蛋白质/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 细菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 总蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子
【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 细菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库
【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶
【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂
【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂
【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选
【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶
【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化
【RNAi技术】 siRNA 反义寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文库
【蛋白检测】 Western印迹 报告基因检测 蛋白检测试剂盒
【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物
【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测
【相关检验试剂】 食品安全检测 药品安全检测
【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定
【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离
【干细胞】 干细胞/祖细胞 原代细胞 干细胞培养基
【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它
【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖
【药物筛选】 荧光素细胞活力/增殖/毒性检测
【免疫检测】 放射性免疫检测 化学发光免疫检测

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分： (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)； (2)酶标记的抗原或抗体(结合物)； (3)酶的底物； (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)； (5)结合物及标本的稀释液； (6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水； (7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液终体积而异，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

实验技术服务：荧光定量pcr服务、hplc(高效液相色谱法检测)服务、emsa(凝胶迁移或电泳迁移率实验)、酶联免疫(elisa)实验技术服务、免疫组化(ihc)技术服务、rna干扰(sirna,miran)、双向电泳、免疫共沉淀、科研整体实验外包服务、流式细胞检测服务、细胞培养技术服务、四甲基偶氮唑盐比色法(mtt方法、sci生物医学论文服务、荧光原位杂交fish服务、载体构建实验技术服务、抑制性消减杂交(ssh)技术服务、单核苷酸多态性分析(snp)检测服务、real-timepcr实验技术服务。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中。一传二。传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。