免疫复合物的纯化
时间：2018-06-21 阅读：1259
蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％叠氮钠裂解缓冲液配成10％(V／V)的混悬液，4℃保存)
不含DTT的Laemmli样品缓冲液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚蓝)
蛋白A或蛋白G微珠混悬液可在用前准备，4℃保存于含叠氮钠的溶液中。
2) 冰上孵育1h。高亲和力的结合反应在1h内完成。因而，1h的孵育时间可使大部分的抗体完成反应。
3) 在抗体-抗原反应液中加入100ul蛋白A或蛋白G微球(用裂解缓冲液配制成10％混悬液)，4℃摇动孵育1h。
尽管有些操作手册建议反应过夜，但实际上并无好处，还会增加背景，因此不主张反应过夜，除某些特殊情况外。
4) 以10000g，4℃离心15s，收集微球。用裂解缓冲液清洗免疫复合物3次。裂解产物和洗涤缓冲液很容易通过抽吸法除去。
