德国cellendes的3D细胞水凝胶系统是一套用于3D细胞培养时构建细胞外基质组分的试剂。使用者可以利用这些试剂控制细胞外环境，设计适合细胞生存的3D系统。

3D细胞水凝胶系统与活体细胞外基质相似，采用该系统可使体外细胞培养更接近体内的生理特征，是基础研究、药物筛选和再生医学等领域细胞功能研究的理想选择。

一、使用cellendes 3D细胞水凝胶系统时的注意事项：

1. 所有步骤均在无菌环境下操作。
2. 一般选择使用10x CBpH 5.5，10x CBpH 5.5不适合时，才会使用10x CBpH 7.2 。但是使用10x CBpH 7.2时，凝胶形成的速度很快，降低CB的pH值，可以减缓凝胶形成的速度，可以混合10x CBpH 5.5和10x CBpH 7.2 。

CBpH 5.5和CBpH 7.2混合后CB的pH值（详见说明书p10）

3. 细胞悬液： PBS或培养基悬液
4.  Mal-PVA或Mal-Dextran溶解后冰浴上使用。溶解后应放于-80℃保存，使用时避免反复冻融，如果短期内使用，可以4℃放置（1周左右）
5. PEG-link和CD-link不要长时间暴露在空气中

二、使用cellendes 3D细胞水凝胶系统时实验前准备：

1. 解冻、溶解3D水凝胶组分（详见说明书），保证全部溶解
2. 如果3D水凝胶需添加RGD肽（详见说明书）：
A. 用水溶解RGD肽，使终浓度是3.0mmol/L
B. 如需比较RGD肽不同浓度的效果，会使用硫代甘油，需将硫代甘油：水=1：6.7溶解，使终浓度是3.0mmol/L
3. 保证Mal-PVA或Mal-Dextran 冰浴上
4. 准备细胞悬液（PBS或培养液），建议细胞悬液浓度时2-4 x106/ml，使zui终浓度时10000-20000个细胞/30ul

三、无RGD肽时cellendes 3D细胞水凝胶系统实验操作：

注：需保证马来酰亚胺基团（Mal- ）和硫醇基团（SH- ）等量
可以预实验决定凝胶强度

注：CBpH5.5和细胞悬液的量是不变的，为了保证等渗条件

实验步骤如下：

A．按上表混合水、CBpH5.5、Mal-PVA(或Mal-Dextran)、细胞悬液于一管（管1）中
B．将PEG-link(或CD-link)滴加到培养皿表面
C. 用吸头吸出管1中的组分，与培养皿上的PEG-link(或CD-link)混合，快速吹打3-4次
D. 避免产生气泡，放置至少一分钟（3-5min），等待凝胶形成
E. 一旦凝胶形成，轻轻加培养液至覆盖住凝胶，盖上培养皿盖，至合适的温度孵育
F. 两个小时后更换新培养基

四、用RGD肽时cellendes 3D细胞水凝胶系统实验操作：

一般情况下1mmol/l或低于1mmol/l的RGD肽，就可以提供足够的粘附力
当需比较RGD肽浓度以及是否需要使用RGD肽时，需用到硫代甘油
下表中列举的是：马来酰亚胺基团（Mal--）=硫醇基团（SH--）=5mmol/l，选择zui合适RGD肽浓度时，需用硫代甘油来调节

 如确定交联强度是5mmol/l，可按下表预实验RGD肽浓度

实验步骤如下：

                     实验操作示意图（30ul体系）

A. 按上表混合水、CBpH5.5、Mal-PVA(或Mal-Dextran)、细胞悬液于一管（管1）中
B. 添加RGD肽和硫代甘油于管1中，快速混匀，室温放置5-10min，有足够的时间使RGD peptide共价结合到马来酰亚胺基团（Mal- ）上
C. 将PEG-link(或CD-link)滴加到培养皿表面
D. 将细胞悬液添加到管1中
E. 用吸头吸出管1中的组分，与培养皿上的PEG-link(或CD-link)混合，快速吹打3-4次
F. 避免产生气泡，放置至少一分钟（3-5min），等待凝胶形成
G. 一旦凝胶形成，轻轻加培养液至覆盖住凝胶，盖上培养皿盖，至合适的温度孵育
H. 两个小时后更换新培养基

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北京群晓科苑生物技术有限公司是德国cellendes的*授权代理商。主推cellendes的3D细胞仿生水凝胶系统。同时，北京群晓科苑还代理insphero的3D悬滴培养板，3D Biotek的3D Insert-PCL/PS支架，您如果对三维（3D）细胞培养感兴趣，欢迎留言或致电