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Development of an Innovative 3D Cell Culture System to Study Tumour - Stroma Interactions in Non-Small Cell Lung Cancer Cells

采用创新的三维细胞培养系统，研究非小细胞肺癌细胞与间质细胞的相互作用

介绍：使用新颖的三维（3D）共培养模型----Insphero AG研发的GravityPLUS 3D悬滴培养系统（GravityPLUS 3D cell culture platform), 研究非小细胞肺癌(NSCLC) 细胞系和肺成纤维细胞的共培养。使用GravityPLUS 3D悬滴培养系统可以研究肿瘤-间质间的相互作用，是更接近于体内的细胞培养模型。

方法：使用多孔悬滴微量培养板（GravityPLUS 3D cell culture platform），研究单细胞的3D培养和多细胞的3D共培养。在悬滴培养板中，研究NSCLC细胞系之 A549细胞的单独培养、NSCLC细胞系之 Colo699细胞的单独培养、A549与肺成纤维细胞的共培养、和Colo699与肺成纤维细胞的共培养。肿瘤微球体形成并稳定后（培养5天和10天后），使用Annexin V/Propidium Iodide（膜联蛋白V/碘化丙啶）对微球体染色并用流式观测；肿瘤成纤维细胞微球体形成后用电镜（SEM）、荧光显微镜、半薄切片和免疫组化（IHC）观测；除了这些常规组织学检测，还用免疫组化的方法检测钙粘素、波形蛋白、肿瘤增殖抗原Ki67、纤连蛋白、角蛋白7和平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达量。

结果：A549单细胞微球体与A549与成纤维细胞培养共培养的微球体相比，生存能力要差一些；而Colo699微球体的生存能力要比Colo699共培养的强。 ki67的表达量在单细胞培养和共培养也存在很大的差异。波形蛋白表达量的增加和钙粘素表达量的减少都能被监测到，表明三维培养过程中存在间质表型的转变。除此之外，只有成纤维细胞系与A549细胞系共培养的时候，才有表达a-SMA，从而表明一种间质状态向另一种间质状态转换。

结论：证明GravityPLUS 3D悬滴培养系统（GravityPLUS 3D cell culture platform)是研究肿瘤微球体共培养的很有利的工具。而且，这些微球体可以进一步探讨肿瘤与间充质间的相互作用，可以更好的反映出肿瘤细胞在体内微环境的状态。Insphero开发的GravityPLUS 3D悬滴培养系统将会为研发抗癌剂及寻找生物标记物做出一些贡献。

Insphero 3D悬滴培养板产品介绍：http://www.qbiotec.com/qxky001-Brand-24075/