缓冲盐使用不当对色谱柱的影响及解决办法
时间：2018-05-22 阅读：1353
在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响。
1.柱压升高原因:缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高；
2.相同化合物的保留时间发生变化原因:如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物保留时间发生变化；
3.柱效下降原因:a.有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；b.凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降。因此，用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。
流动相中缓冲盐的正确使用方法
1.使用前的处理:在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上用于冲洗的流动相与分析所用的流动相含水的比例相同（或者含水更多），不同的是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由:缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的伤害。
2.使用后的处理:用于分析时含水比例相同的流动相（与分析所用流动相*的区别是用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一边，直至基线平稳。缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。