土壤硝酸还原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）试剂盒说明书

                                    分光光度法 50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

S-NR 催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究 S-NR  的活性

对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ  +NADH⁺H  →  NO2ˉ +NAD＋  +H 2 O；产生的亚

＋

硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及  α -  萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的

红色偶氮化合物在  540 nm  有大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：液体 10mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体 4mL×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体 12.5mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

试剂四：液体 12.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：标准品储备液 1mL，-20℃保存。

0.1μmol/mL标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取0.1ml 加蒸馏水定容至10ml。

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定操作表

混匀，室温显色 20min后，4000g，25℃离心10min，用蒸馏水调零，540nm下读取各管吸

光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NR活性计算：

单位的定义：每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个S-NR活力单位。

S-NR（μmol /d/g）=C标准×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V反总÷W÷T=12×

（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）

C 标准管：标准管浓度，0.1μmol/mL；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；T：反应时间，

1h=1/24d； W：样本质量，0.1g。