细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒
时间:2020-11-13 阅读:987
技术背景
细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期,表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征,尤其在酸性条件下,细胞内β-半乳糖苷酶活性增加,而成为细胞衰老的生物学标记。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
固定液(Reagent B) 毫升
酸性液(Reagent C) 毫升
稀释液(Reagent D) 毫升
染色液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀释液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用铝箔封裹,避免光照;有效保证6月
用户自备
2毫升离心管:用于配制染色工作液
15毫升锥形离心管:用于配制染色工作液
恒温培养箱:用于染色孵育
光学显微镜:用于观察染色后的细胞
实验步骤
操作一、25cm2细胞培养瓶染色
实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D)到2毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:
- 小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液
- 小心加入xx毫升清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面
- 小心抽去清理液
- 小心加入xx毫升固定液(Reagent B),覆盖整个生长表面
- 在室温下孵育5分钟
- 小心抽去固定液
- 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C),清洗细胞表面
- 小心抽去酸性液
- 重复实验步骤7和8一次
- 小心加入xx毫升染色工作液,覆盖整个细胞表面
- 放进37℃培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发)
- 在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色。
操作二、24孔细胞培养板染色
实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D)到15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作。
1.小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面
3.小心抽去每孔里的清理液
4.每孔加入xx微升固定液(Reagent B),覆盖整个生长表面
5.在室温下孵育5分钟
6.小心抽去固定液
7.每孔加入xx微升酸性液(Reagent C),清洗细胞表面
8.小心抽去酸性液
9.重复实验步骤7和8一次
10.每孔加入xx微升染色工作液,覆盖整个细胞表面
11.放进37℃培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发)
12.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色
注意事项
- 本产品为100次(4个24孔板)或20次(20个25cm2细胞培养瓶)操作
- 操作时,须戴手套
- 本产品的参数:固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到优化
- 使用时,避免污染母液,否则出现絮状沉淀,影响实验效果
- 染色工作液避免光照
- 细胞β-半乳糖苷酶活性强,孵育3小时即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育24小时
- 细胞染色长孵育时间为24小时
- 孵育时避免液体蒸发
- 本产品染色敏感,甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰;用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度,使染色恰到好处
- 细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方
- 染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里长期保存,同样须避免光照
- 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:
操作容器 | 建议处理液规格 |
载玻片 | 100微升 |
载玻片培养皿 | 1毫升 |
35mm培养皿 | 1毫升 |
96孔培养板 | 100微升 |
48孔培养板 | 200微升 |
24孔培养板 | 500微升 |
12孔培养板 | 1毫升 |
6孔培养板 | 2毫升 |
25cm2细胞培养瓶 | 3毫升 |
- 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品