植物细胞培养影响组织培养的原因分析

芦丁：

激素浓度

不同浓度的2，4-D和6-BA对花瓣、花药、花柱、花托愈伤组织中黄酮类化合物的含量有着不同的影响。

0.05mg/L2,4-D+0.5mg/l 6-BA或者0.2mg/l 2,4-D+1ml/L 6-BA 为花瓣愈伤组织培养生产黄酮类化合物的较佳激素浓度

0.05mg/L2,4-D+0.5mg/l 6-BA或者0.5mg/l 2,4-D+10.5ml/L 6-BA 为花柱愈伤组织培养生产黄酮类化合物的*激素浓度。

0.05mg/L2,4-D+0.5mg/l 6-BA或者0.2mg/l 2,4-D+1ml/L 6-BA 为花托愈伤组织培养生产黄酮类化合物的*激素浓度。

前体物质

对不同激素浓度和花蕾的不同部位产生的愈伤组织添加苯丙氨酸，会产生不同效果。含0.2mg/L2,4-D+0.5mg/l 6-BA 的培养基中添加本病氨酸可使花药、花柱产生的愈伤组织中黄酮类化合物含量明显提高，二花瓣、花托产生的愈伤组织中黄酮类化合物含量下降，当2,4-D 含量增高到0.5mg./l，则花瓣花托、花柱愈伤组织中黄酮类化合物含量均有一定程度的增高，花药愈伤组织中黄酮类化合物含量下降。

酪胺酸加入后黄酮类化合物含量有显著提高，且优于加入苯丙氨酸，其原因可能是两种前提氨基酸经不同途径转化为黄酮类化合物，酪氨酸途径中酪胺酸解氨酶活性要高于苯丙烷类途径中的苯丙氨酸解氨酶；。

水木雪莲

温度：

雪莲是喜欢低温的植物，无论是愈伤组织还是组培苗都需要在较低温度下才能生长良好，超过25℃愈伤组织逐渐变褐，组培苗枯死，较大温差也是促进其生长的游离因子。

光照：

光照对许多植物中黄酮类化合物的合成具有诱导作用，白光、蓝光、红光、远红光等不同光质照射及不同的白光强度对水母雪莲愈伤组织细胞生长、苯丙氨酸解氨酶活性及黄酮合成有不同的影响,而PAL是植物细胞中黄酮生物合成途径中的*个关键酶。红光明显促进愈伤组织的生长，但强烈抑制PAL活性和黄酮的合成。蓝光对愈伤组织生长无明显影响。但显著提高PAL活性和黄酮的合成。白光的作用介于红光和蓝光之间，远红光作用与蓝光相似，单作用比较弱。每天16小时蓝光加8小时白光和8小时蓝光加16小时白光的组合产生zui高的黄酮含量和黄酮生产率，光照培养对愈伤组织生长的影响大大有利于暗培养。

碳源：、

植物细胞培养一般采用蔗糖、果糖、葡萄糖为碳源。在MS培养基上进行水木雪莲细胞悬浮培养的碳源以蔗糖zui为合适，其浓度以40g/L较好，果糖的加入对细胞生长没有显著影响。还童合成却明显减少，当蔗糖与葡萄糖组合时，30g/L蔗糖+10g/L葡萄糖的组合得到zui高的黄酮类产量，达到1.75mg/L。当总糖浓度高于50g/L时，黄酮类形成受到强烈抑制。

较高的初始蔗糖度对细胞生长和黄酮合成没有明显抑制作用，即水母雪莲细胞能够耐受叫噶的糖浓度和较高的渗透压。

在悬浮细胞培养过程中，水木雪莲细胞能快速将蔗糖水解为葡萄糖和果糖，并优先利用葡萄糖

氮源：

氮源总浓度对细胞干重和黄酮合成的影响较为明显。高浓度的氮源对细胞生长和黄酮合成产生抑制作用。总氮浓度为0.04mmol/L时愈伤组织生长量和黄酮类产量zui高，分别达到18.82g/L和1.33g/L

不同NH4+ /NO3- 比例下，水木雪莲细胞生长和黄酮的合成量有一定差别。当NH4+/NO3- 的比例为20/40时，有利于细胞生长和黄酮合成。NH4+供应不足会限制细胞的生长和代谢，而NH4+/NO3-  的比例为30/30\40/20、50/10时 细胞生长速度较慢。

激素：

对雪莲愈伤组织的生长以1mg/L NAA+0.2mg/LKT组合的效果较为理想，可以较低的激素浓度达到较高的细胞生长量。2mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA的组合亦可得到较高的黄酮类产量。

非生物诱导子

硝酸银作为一种非生物诱导子，能诱导水母雪莲悬浮培养细胞黄酮的生物合成，但浓度会抑制细胞的涨涨，诱导子作用的效果依赖于培养细胞的生理状态，只有出于一定生长时期的细胞才能有效的接收诱导信号，硝酸银的添加时间越早，对环统合成的诱导作用越强，

谷胱甘肽可以诱导一些植物的防御反应 基因的表达。低浓度的谷胱甘肽对雪莲细胞的生长影响不大，但高浓度的谷胱甘肽可以抑制细胞的生长，使培养细胞的生物量降低。谷胱甘肽对水木续报的诱导一方面提高了代谢中某些酶的活性。另一方面，高浓度的谷胱甘肽可以导致细胞活性降低，二者的共同作用决定了培养细胞黄酮的zui终产量。