抗坏血酸（Vc）测试盒说明书

一、试剂盒组成及配置（50T/48样)

   试剂一；贮备液5mlx1瓶，4℃保存6个月。

         试剂一应用液配制：用时按照试剂一贮备液：双蒸水=1:14稀释，混

         匀制备。 

   试剂二：粉剂x1支，4℃保存6个月。

         试剂二应用液配制：用时一支粉剂加0.36ml冰醋酸再加水至40ml，

         溶解，4℃保存。

   试剂三：白色结晶体粉剂x1支，4℃保存6个月。

         试剂三应用液配制：因胶南溶解，用前2-4小时加95%乙醇或无水乙

         醇60ml充分溶解，制备，4℃保存。

   试剂四：黄色贮备液0.2mlx1瓶，冰箱4-8℃避光保存，贮存时间6个月。

         试剂四应用液配制:用时取0.15ml试剂贮备液加水至25ml制备。（先

         用现配）

   试剂五：液体6mlx1瓶，4℃保存6个月。

   试剂六：Vc标准品：粉剂6mgx3支，每瓶内含维生素C，4℃保存6个月。

        60ug/ml Vc标准品应用液的配制：将1支标准品粉剂溶于10ml试剂一

        应用液中，制备。

        6ug/ml Vc标准品应用的配制：取60ug/ml Vc标准品应用液再用试剂

        一应用液10倍稀释备用，现用现配。

注：维生素C标准品易氧化，因此，在样本上清液制备好后在配标准，并在10分钟内进行检测。

二、操作过程：

   1、上清液制备：取样本0.15ml加1号试剂0.45ml，旋涡混匀，放置15分

      钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。

   2、  上清液中Vc的测定：

混匀放置10分钟，1cm或者0.5cm光径，双蒸水凋零，536nm处测各管的OD值。

三、计算公式：

1、血清（浆）的计算与举例：

①、计算公式：

②、计算举例：

例1：    取许晴0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.031，标准管OD为0.184，测定管为OD为0.144，则计算结果为：

2：组织的计算与举例：

①、计算公式：

②、计算举例：

例1:    取 10%大鼠肝匀浆0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.032，标准管OD为0.184，测定管为OD为0.146，同时测得10%大鼠肝匀浆蛋白浓度为8.5mgprot/ml。

则计算结果为：

例2：   取20%轮虫匀浆0.15ml，按操作表操作，测得空白管OD为0.031，标准管为OD为0.186，测定管为0.177，同时测得20%轮虫匀浆蛋白浓度为0.8537mgprot/ml。则计算结果为：

四、测定原理：

    本法对Fe与还原性抗坏血酸迅速作用生成Fe，后者在于菲罗啉显色反应，可以测定血浆中维生素C的含量。

五、测定的意义：

维生素C在体内参与胶原物质合成，是脯氨酸羟化酶和赖氨酸羟化酶的辅因子，是催化多巴胺转变成去甲肾上腺的铜酶多巴β羟化酶所必需，当维生素C缺乏时，合成的胶原得不到充分的强化，不能很好的形成纤维

维生素Czui明显的化学活性是作为还原剂，他可以将Fe还原成Fe，促使铁在肠道吸收，促进铁的贮存和利用。

抗坏血酸作为自由基清除剂，可以很快地与O,反应，更快地与反应生成抗坏血酸自由基，它也可以清楚O，因此，抗坏血酸可以保护机体免受内源性氧自由基的损伤。

维生素C能与α-生育酚自由基花怒按成维生素E，间接的骑着链阻断剂作用。

维生素C是血浆中有效的抗氧化剂，是细胞外液抗氧化防御系统的*道防线，Vc对血浆中正在进行着脂质过氧化作用也有阻断作用。