人工合成着色剂主要以苯、甲苯等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应而制得的人工色素。合成着色剂能有效改善食品色泽，被广泛应用于食品加工中，中国食品添加剂使用卫生标准列入的合成色素主要有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等等。

肉制品生产中，着色剂虽然可以改变肉制品的色泽，增加消费者的购买欲和食欲，然而它也可以掩盖肉制品中不新鲜原料肉，成为不法销售者获取非法利益的手段。合成着色剂少量食用可经肝肾代谢排出体外，但是若长期或一次性大量食用色素含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状，因而各国都严格控制合成着色剂的使用范围和使用量。肉制品中柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红着色剂被列为禁用，而you惑红限用于西式火腿类、肉灌肠类和可食用动物肠衣类食品。
本实验参考GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂红着色剂测定》以及GB2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》，采用依利特公司生产的高效液相色谱仪，对着色剂标准品，线性以及加标回收率等进行检测方法验证，并且检测实际肉制品中柠檬黄、胭脂红、日落黄、苋菜红、you惑红的添加情况。

实验方法

1.样品前处理
1)将切碎的肉样，用打肉机将肉搅成糊状，并用均质机对肉制品进行均质化后，精密称取一定量的样品2.0g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入20mL石油醚，涡旋1min后，5000r/min离心5min，弃去石油醚上清液，重复操作一次。
2)氮气吹干剩余石油醚，加入5mL乙醇氨涡旋1min，超声30min，以10000r/min的速度离心5min，移取上清液至10mL离心管中，重复操作一次，合并上清液。
3)上清液75℃下氮气吹至2mL左右，水洗转移至10mL离心管中，用柠檬酸调节PH值至6左右，取8mL样品上SPE小柱待净化。
2.SPE小柱的活化
聚酰胺PA-1（6mL/500mg）经5mL甲醇和5mL纯化水活化后，上样。
上样和洗脱：先用2ml纯化水冲洗，然后用2mL甲醇-甲酸溶液冲洗，抽干小柱，用5mL5%的氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于65℃条件下氮气吹干后，用1mL流动相溶解定容后，经0.45µm滤膜过滤，取溶液10μL进样。
3.色谱条件
流动相A：0.02mol/L乙酸铵溶液
流动相B：甲醇
色谱柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm
柱温：35℃
流量：1.0mL/min
进样体积：10μL

实验结果
1.着色剂标准品分析结果

2.标准品线性相关性
配制浓度分别为0.2µg/mL、0.4µg/mL、0.8µg/mL、2.0µg/mL、4.0µg/mL、8.0µg/mL、20.0µg/mL的着色剂的混标工作液，按浓度由低至高进样，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，着色剂的标准溶液线性相关性结果如下。

结果表明，这5种色素在0.2µg/mL至20.0µg/mL浓度范围内，仪器检测具有良好的线性相关性。
3.小检出限
以3倍信噪比为仪器的检出限，所得仪器及方法检出限如下：

4.加标回收率
采用方法中描述的前处理过程，对空白、猪肉样品以及加标样品进行处理后，采集数据，并计算所对应的加标回收率结果见下表。

根据前处理方法，计算得到的各肉制品中着色剂的含量见下表：

结论

采用依利特公司EClassical 3100高效液相色谱仪，参考GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂红着色剂测定》以及GB 5009.35-2016《食品中合成着色剂的测定》并对实验条件做进一步优化后，对合成着色剂标准品以及市售肉制品进行检测，检测结果表明该系统线性良好，并且仪器灵敏度高、定性和定量准确，良好的仪器精密度，适用于肉制品中着色剂的含量测定。

参考文献

[1]GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》
[2]GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂红着色剂测定》
[3]GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》