1、柜内放置的仪器和材料保持在低数量。静压箱后部的空气循环不得受阻。将材料放入安全柜的工作区之前，应对其表面进行去污处理。
2、操作手后方的活动要达到少。
3、柜内不得使用本生灯(一种煤气灯)，因其产生的热会干扰气流并可能损坏过滤器。可以使用微型电焚烧炉，但使用一次性灭菌环则好。
4、要根据标准和有关的规定，向所有可能使用生物安全柜的用户解释安全柜的使用及限制条件。应发给工作人员书面规定或安全手册或操作手册。是明确告诉工作人员，在出现溅洒、破碎、方法不当的情况下，安全柜无法保护操作人员。
5、前送风格栅不得被便签、滴管、或其他材料堵住，否则会干扰气流从而可能使材料受到污染，使人员处在暴露状态。
6、应在每次工作完成后及一天结束时，使用合适的消毒剂清洁安全柜的表面。
7、柜子的风扇在工作开始前和工作完成后要再各运行5分钟。
8、安全柜只有在工作正常时才能使用。
9、安全柜前脸的玻璃观察窗不得在安全柜处使用状态时打开。
10、柜内所有的工作要在工作面的中部或后部进行，并能从观察面板中看到。
11、操作手不应将手臂来回伸进出柜子，以免干扰气流。