人小梁网细胞

细胞描述：小梁网细胞（TMC）在房水流动机制中发挥重要作用。在 TMC 中已发现特定的神经递质和神经肽受体，其中包括***，乙酰胆碱和神经肽 Y 。此外，在 TM 细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制[1] 。TMC 合成了不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。TMC 培养为TMC 药理特性研究提供了有价值的工具[2]。小梁网细胞(HTMC)分离自人眼的近小管组织和角巩膜区域，于原代并存。每瓶 1 毫升含有> 5 × 10 ^ 5 的 HTMC 细胞人小梁网细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、

传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行

质量控制： 本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。

培养条件：37℃，5% CO2，PH 值7.2~7.4，无菌恒温培养。

用途： 本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。

细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：

• 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；
• 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；
• 将培养瓶置于 37°C，5% CO₂ 的无菌培养箱中培养 4-6 小时；
• 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；
• 重新将培养瓶置于 37°C，5% CO₂ 的无菌培养箱中培养过夜
• 第二天传代。

收到冻存细胞的处理方法：

1.37°C 水浴预热培养基；

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C 水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；

3.在超净台中加入5ml 培养基重悬细胞，1000rpm 离心5min；

4.弃上清，加入5ml 培养基重悬细胞后转入 T25培养瓶中，轻轻晃匀；

5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；

6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代

1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；

2.37°C 水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS 清洗细胞后，再加入1ml 胰酶消化细胞；

4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml 培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞移入离心管中，1000rpm 离心5min；

7.弃上清，加入15-20ml 的培养基重悬细胞后转入 T75培养瓶中或按适当比例传到 T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保均匀分布；

8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存

 1.37°C 水浴预热培养基；

2.消化细胞后给细胞计数:

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片*覆盖计数区；

2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul 混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；

3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm 即10^-4cm³计数池内，1cm³=1ml，将

四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。

注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。

3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。

4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm 离心5min。5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO 的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×10⁶/ml。6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。

7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 过夜，然后快速转移到液氮中。