「LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit」「PYROSTAR™ Neo+」

富士胶片和光纯药株式会社（总部：大阪市中央区，社长：吉田光一）于2024年7月1日正式推出以下两款新产品。包括in vitro¹检测热原的MAT法²用试剂盒——LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit（以下简称LumiMAT™），其可作为动物实验的替代方法；以及不含动物来源成分的重组内毒素检测用试剂“PYROSTAR™ Neo+”。

在药品和医疗器械的开发和生产过程中，需要使用动物进行实验，以确保对人体的安全性和有效性。热原检测是对进入人体血液后引起发热、休克等生物反应，甚至导致死亡的热原进行的检测，对于确保非口服药、注射器及导管等与血液直接接触的医疗器械的安全性至关重要。热原可分为内毒素热原和非内毒素热原，以鲎血为原料的LAL试剂³被用于检测内毒素，而家兔热原实验⁴则常用于检测非内毒素热原污染。这些检测方法已被列入日本、欧洲、美国等国家的药典，但近年来，随着对使用实验动物的伦理关注以及对生物多样性保护的日益重视，改用不依赖动物的替代法的呼声日益高涨。

本次推出的LumiMAT™是in vitro检测热原的MAT法用试剂盒，可替代家兔热原实验。欧洲决定在2026年前从欧洲药典中删除家兔热原实验，其它地区也可能采取相同措施。因此，关于改用MAT法的讨论愈发活跃。

目前市售的MAT法用试剂大多使用了血液来源的PBMC⁵（外周血单核细胞），通过ELISA法检测热原暴露时单核细胞释放的细胞因子，从而检测样品中的热原。但该方法存在PBMC的批次间差异和分析时间长的问题。另外，还需要人的血液作为原料，因此还存在原料稳定性方面的问题。而FUJIFILM Wako开发的LumiMAT™采用了从多种细胞系⁷中筛选、对热原具有高灵敏度的NOMO-1细胞⁸。通过培养细胞系增殖进行生产，因此批次间差异小、获得更可靠的检测结果的同时，也提高了原料的来源稳定性，可稳定供应。而检测方法采用了可检测转录因子NF-κB^９激活情况的荧光素酶报告基因检测法¹⁰，可简单快速得到结果。传统的MAT法需要约1.5天才能得到结果，而LumiMAT™ 仅需5 h左右即可完成检测。

LumiMAT™采用NanoLuc^®技术。NanoLuc^® 技术由Promega Corporation授权。授权专-利：美国专-利第8557970号、美国专-利第8669103号以及与美国专-利第8557970号、美国专-利第8669103号享有同等优先权的所有专-利及申请中的专-利。NanoLuc^® 为Promega Corporation的注册商标。

另外，同时推出的重组内毒素检测试剂PYROSTAR™ Neo+，由构成鲎内毒素反应机制¹¹的三因子（鲎C因子、B因子和凝固酶原）的人工合成的基因重组蛋白组成，利用显色法¹²原理，可高精度检测内毒素含量。PYROSTAR™ Neo+不仅保留了PYROSTAR™ Neo（于2021年12月推出）的高灵敏度和溶解后优异的稳定性，还降低了因某些药物引发的干扰反应、提高了对天然内毒素的反应性能，可适用于更多样品。本产品兼容多种内毒素检测设备，不仅可用于医疗药品和医疗器械认证申请时的安全性评估，还可广泛用于质量管理，如药品的原料检查以及药品生产用水的水质管理等。

PYROSTAR™ Neo＋

FUJIFILM Wako通过开发和销售以上产品，以满足不依赖动物的热原检测需求，今后也将继续以 "助力未来科学研究，创造人类幸福源泉 "为使命，开发和提供能够满足社会和客户需求的高功能、高品质产品，在医疗和其他领域为工业生产和科研发展做出贡献。

◆MAT法的操作步骤

FUJIFILM Wako的LumiMAT™采用了荧光素酶告检测法，细胞因子无需持续培养至ELISA法检测所需浓度，因此可更便捷地得到检测结果。分析时间可从普通MAT法的约1.5天，缩短至约5h。

注释

1. 在培养容器等中对人/动物的细胞或组织进行的检测。

2. Monocyte Activation Test（单核细胞活化反应测定法）的缩写。利用人单核细胞被热原激活后产生的炎症因子等物质检测热原。

3. Limulus Amebocyte Lysate（鲎血变形细胞裂解物）的缩写，从鲎血细胞提取物中制备的内毒素检测用试剂。

4. 向家兔静脉中注射样品，观察其体温变化以确认是否存在热原。

5. Peripheral Blood Mononuclear Cells（外周血单个核细胞），从外周血中分离的单核细胞。

6. Enzyme-linked immuno-sorbent assay（酶联免疫吸附试验）的缩写。使用特异性抗体或抗原捕获样品溶液中的目标抗原或抗体时，利用酶促

     反应进行检测和定量的方法。

7. 细胞系是指能够长期稳定地进行增殖和培养的细胞。

8. 人单核细胞白血病细胞系。

9. Nuclear Factor kappa B（核因子κB）的缩写，是调节与免疫和炎症反应等相关的基因表达的转录因子。

10. 热原与细胞的Toll-like Receptor（TLR）结合后会激活NF-κB，随后诱导报告细胞表达荧光素酶蛋白，因此可通过测定与发光底物的发光反应强

      度来检测热原。

11. 鲎的一种生物防御机制，体液与内毒素发生反应时会凝固。内毒素会连续激活鲎的血细胞成分—C因子、B因子和凝血酶前体，最终使体液凝

      固。

12. 检测内毒素的方法之一。鲎试剂中的合成底物与内毒素反应后被分解而发生显色反应。

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