ELISA试剂盒操作步骤：猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）ELISA试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）表达。用纯化的抗原包被

微孔板，制成固相抗原，可与样品中乙型脑炎抗体（JE-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）的存在与否。

猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）ELISA试剂盒操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD值<临界值（CUTOFF）者为猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）阴性

阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）阳性。

注意事项

1．操作严格按照猪乙型脑炎抗体（JE-Ab）ELISA试剂盒说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月