大鼠白三烯C4(LTC4)elisa试剂盒操作步骤
时间:2015-04-28 阅读:716
大鼠白三烯C4(LTC4)elisa试剂盒操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
4800ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
2400ng/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
1200ng/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
600ng/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
300ng/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
大鼠白三烯C4(LTC4)elisa试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白三烯 C4(LTC4)水平。用纯化的大鼠白三烯 C4(LTC4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白三烯C4(LTC4),再与HRP标记的白三烯 C4(LTC4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白三烯 C4(LTC4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠白三烯C4(LTC4)浓度。