大鼠丁二酸(SCA)酶联免疫分析试剂盒说明
时间:2015-05-08 阅读:715
大鼠丁二酸(SCA)酶联免疫分析试剂盒说明:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
20pg/ml 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
10pg/ml 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
5.0pg/ml 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.5pg/ml 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
大鼠丁二酸(SCA)酶联免疫分析试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠丁二酸(SCA)水平。用纯化的大鼠丁二酸(SCA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入丁二酸(SCA),再与HRP标记的丁二酸(SCA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的丁二酸(SCA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠丁二酸(SCA)浓度。