MaxCyte电转：开启角化细胞工程化之门，重塑皮肤治疗未来
时间：2024-12-05 阅读：115
内容摘要
(1) 角化细胞 (Keratinocytes) 在治疗多种皮肤、口腔和耳部疾病方面具有潜力。
(2) 成年角化细胞的体外培养和扩增容易，适合自体和同种异体细胞治疗产品。
(3) 之前限制：成年角化细胞缺乏高效的转染方法。
(4) 本研究目标：开发符合GMP标准的、可扩展的细胞工程流程，使用MaxCyte®电穿孔技术转染来自四个不同解剖位置的新生儿和成年原代角化细胞。
实验流程
• 从全皮样、鼓膜、扁桃体、前臂等部位提取纯净的原代角化细胞。
• 胞培养、扩增、冷冻保存、基因工程、验证，最终形成细胞治疗产品。
主要发现
• 使用MaxCyte技术，高效地将mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 传递给原代角化细胞，不损害细胞活性、形态或生长能力。
上图：使用MaxCyte ATx电转仪对原代包皮角化细胞进行mRNA-GFP或ATTO550标记的CRISPR RNPs电穿孔后的流式细胞仪分析结果，显示了高效的转染效率。
上图：使用CCR5靶向CRISPR RNP电穿孔后的原代角化细胞的生长曲线，电转后细胞增殖几乎不受影响。
上图：使用MaxCyte ATx仪器对来自不同解剖位置的原代皮肤成纤维细胞、扁桃体来源的口腔角化细胞和鼓膜 (中耳) 角化细胞进行ATTO 550标记的CRISPR RNPs电穿孔后的流式细胞仪分析结果，显示了高效的转染效率。
• 单次电穿孔可实现高效的多重基因编辑，简化了流程。
上图：分别电穿孔1种、2种、6种CRISPR RNPs后96小时，使用Synthego®多向导基因敲除试剂盒进行的流式细胞仪分析。
• 提高了转染效率和细胞活性，减少了角化细胞工程时间，提高了成功率。
• 展示了MaxCyte电穿孔过程的可扩展性，可工程化数百万原代角化细胞，不损失效果。
MaxCyte电穿孔技术使原代角化细胞基因组工程更快，风险更低。
全文结论
(1) MaxCyte ATx®平台提供了一种高效、符合GMP标准的多重转染方法，用于开发和生产工程化角化细胞治疗产品。
(2) 电穿孔技术保持了原代新生儿和成年角化细胞的高活性、正常形态和低氧化应激。
(3) 该技术允许多达6个CRISPR RNPs的传递，经过多轮转染，效率不降低。
(4) 平台的灵活性允许快速开发特定亚群的角化细胞和成纤维细胞的自体和同种异体细胞治疗流程。
(* 本文转载自「拓普百奥」微信公众号，作者：宇文数学，已获得作者授权)
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