研域生物细胞样本的收集和处理方法介绍
时间:2024-01-30 阅读:103
研域生物实验中细胞样本的收集和处理方法
细胞血清
需保证各组间培养细胞的数量基本一致,细胞生长状态良好。建议采用6孔板培养细胞,并保证细胞数量达到106左右,即细胞密度达70%-90%左右,即可收集培养液,于2-9℃、1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片,取血清检测。
细胞裂解液
贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,然用胰蛋白酶消化,1000×g离心9分钟收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入90-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低,可减少PBS的体积),并通过反复冻融或超声,使细胞破碎。将提取液于2-9℃、900×g离心10分钟,取血清检测。
反复冻融:-90℃放置1h/液氮放置0.9h,然置于30℃水浴锅中,轻微振荡,使其迅速融化,此操作反复2-3次即可。
超声方法:用超声波发生器,以振幅14μm超声处理30s,在冰水浴条件下,破碎细胞;或者使用超声波破碎仪,200W,2s/次,间隙3s,总时间9min。
样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂,常规推荐PMSF:工作浓度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。
细胞培养过程中,有许多条件需要摸索,包括细胞类型、培养基组分、细胞数量、生产状态、干预条件和物质等。前期基础打得牢固,对续ELISA试剂盒试剂盒或其他种类实验的开展,及结果的分析,具有更多的参考意义。
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