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亮发光杆菌的分离、培养

时间:2017-09-14      阅读:689

亮发光杆菌实验方法   
1、铜柱系统除氧
2、预还原培养基及稀释液的制备
      制作预还原培养基及稀释液时,先将配置好的培养基和稀释液煮沸驱氧,而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中,一般琼脂培养基装4.5~5.0mL,稀释液装9mL,并插入通N2气的长针头以排除O2。此时可以清楚的看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红zui后变成无色,说明试管内已成为无氧状态,然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖,灭菌备用。
3、分离
(1)编号
      取五支无菌水试管,分别用记号笔标明10-1、10-2……10-5。
(2)稀释
      在无菌条件下,用无菌注射器吸取1mL混合均匀的液体样品,加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中,用震荡器将其混合均匀,制成10-1稀释液。用无菌注射器吸取1mL10-1稀释液至另一装有9mL生理盐水的厌氧试管中,制成10-2稀释液。依此进行10倍系列稀释,至10-7,制成不同样品稀释液。通常选10-5、10-6、10-7三个稀释度进行滚管计数。
(3)滚管分离
1)滚管
      将无氧无菌的琼脂培养基在沸水浴中溶化,置46-50℃恒温的水浴中,待用,用无菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三个稀释度各0 .1mL,分别注入待用的试管中,然后将其平放于盛有冰水的瓷盘中迅速滚动,带菌的溶化琼脂在试管内壁会即刻形成凝固层。
2)分离
      生成的亮发光杆菌落需挑取出来,镜检其形态及纯度。如尚未获得纯培养物,需再次稀释滚管,并再次挑取菌落,直至获得纯培养物为止。待挑取的单菌落预先在放大镜下观察确定,做好标记。然后将培养基试管固定于适当的支架上,打开试管胶塞,同时迅速将气流适当、火焰灭过菌的氮气长针头插入管内。同时,另一液体厌氧管去掉胶塞插入另一灭过菌的通气针头。将准备好的弯头毛细管小心插入固体培养基内,找准待挑菌落,轻轻吸取,转移至液体试管内,加塞。37℃培养。培养24h或待培养液混浊后检查已分离培养物的纯度。
邻苯二甲suan丁苄酯-D4 标准品    纯品型,有证书,10mg    CDEO-NF014-25mg    呋喃唑酮代谢物的衍生物2-NP-...    25mg    CDCT-C16168010
连*苯/1,2,3-*基苯    1000mg/L;1ml    CDGG-021128-02    1,2-二溴四氟乙烷(Hlon ...    2000mg/L;1ml    CDGG-020869-05
喹氧灵    1000mg/L;1ml    CDGG-031657-02    戊菌唑    1000mg/L;1ml    CDGG-031836-03
奎宁 标准品    纯品型,有证书,0.1g    CDDM-M884100-25mg    杨梅素    25mg    CDCT-C16706900
可溶性淀粉    5g    CDGG-010408-08    蔗糖 标准品    25ml    CDCP-CARB-37-5g
糠醛    2000mg/L;2x0.6ml    CDGG-031049-01    呋喃    1000mg/L;1ml    CDGG-031264-02
亮发光杆菌

 

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