探针法qPCR试剂盒的特点和实验注意事项
时间:2022-12-25 阅读:726
1、定量准确、实验耗时短
从探针法qPCR原理可以看出,扩增引物和探针序列都匹配后扩增的产物才能产生荧光信号,这样就确保了荧光信号是目的片段的扩增产生的,排除了非特异性扩增的影响,特别是针对一些低拷贝和低浓度的样品,检测结果所见即所得,从而保证了检测的准确性。因探针法qPCR的高特异性,因此无需再设置熔解曲线检测扩增产物的特异性如何,有效缩短了实验时间。
2、特异性高
在探针法qPCR中,除加入引物外还增加一条特异性探针,当引物和探针都与靶基因结合时,扩增时探针才会被水解酶切发出荧光。当引物发生非特异性扩增时,探针不会结合到非特异性片段上,因此不会被水解酶切而发出荧光,从而提高了特异性。
3、兼容多重反应
在探针的5'端标记不同的荧光修饰,则不同的探针在检测过程中就会发出不同的荧光信号。根据此原理可以将检测不同目的基因或者基因型的探针标记不同的荧光修饰做混合检测,这样就可以做多重检测,检测对应的荧光信号就是检测对应探针的荧光定量结果。多重检测大大节省了检测的物料试剂成本,也大大节省了检测时间,进一步提高了检测的速度和适用性。
探针法qPCR试剂盒的实验注意事项:
1)PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。