悬浮细胞的处理方法;奥陆生物
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悬浮细胞处理方法
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。从细胞资源中心获得细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作。
将细胞悬液移入离心管,1000rpm/min 离心5分钟。上清培养液移入无菌瓶中,留待日后培养用。离心下来的细胞T25瓶中加培养液6-8ml,混匀后放入37℃、5%CO2孵箱培养。
传代方法:
细胞生长至1X106/ml时(一般情况),将细胞悬液移入离心管800-1000rpm/min离心5分钟,然后弃上清,加新鲜培养液混匀,1瓶分成3瓶(或6瓶-10瓶),每T25瓶加培养基至6-8ml,37℃、5%CO2孵箱培养
该细胞使用培养基:1、DMEM(高糖) 2、R1640 3、R1640(改良) 4、MEM(EBSS) 5、MEM(NEAA) 6、D/F12 7、F12 8、F12K 9、MaCcoy‘ 10、L15
血清要求:1、20%FBS 2、15%FBS 3、10%FBS 4、5%FBS 5、2.5%FBS 6、15%HS 7、10%HS 8、5%HS 9、2.5%HS 10、10%CCF(灭活)
冻存液:常规培养液+20%FBS+8%DMSO