脂肪测定仪---粮油检验 植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯的测定2
时间：2019-05-12 阅读：1821
3.2.2 样品测定
液相色谱条件
色谱柱：反相色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）或相当型号色谱柱。柱温：40oC。进样量：20μL。流动相：A为甲醇/水（92:8，v/v），B为异丙醇。流动相洗脱程序：0-18.0 min，0%B（流速为1mL/min）；18.1-32.0min，100%B（流速为0.5mL/min）；32.1-42.0min，0%B（流速为1mL/min）。
质谱条件
离子源：APCI源。喷雾器温度：500oC。干燥气温度：350oC。鞘气压力：50arb。辅助气压力：2rb。电晕电流：8μA。选择性离子监测（SIM）：C16:0-GE为m/z 313.3，C18:0-GE为m/z 341.2，C18:1-GE为m/z 339.4，C18:2-GE为m/z 337.3，C18:3-GE为m/z 335.3。
根据缩水甘油脂肪酸酯工作溶液的浓度及其峰面积，绘制标准曲线。
3.2.3 方法学验证
3.2.3.1 标准曲线及相关系数
以标准工作液浓度（c）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标做标准曲线并计算相关系数，结果如表1所示。
表1 缩水甘油脂肪酸酯的标准曲线方程及相关系数
缩水甘油酯
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线性范围（ng/mL）
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标准曲线方程
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R2
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C16:0-GE
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5~200
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y=241614x-208371
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0.9999
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C18:0-GE
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5~200
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y=124722x-76195.4
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0.9997
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C18:1-GE
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10~400
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y=268901x-1295670
|
0.9994
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C18:2-GE
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10~400
|
y=217331x-559031
|
0.9999
|
C18:3-GE
|
5~200
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y=138762x-173831
|
0.9996
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3.2.3.2 方法回收率及精密度实验
取GE含量都低于低检出限的样品作为基质，称取1.00g，加入100μL C16:0-GE、C18:0-GE、C18:3-GE浓度为100ng/mL同时C18:1-GE、C18:2-GE浓度为200ng/mL的标准混合溶液，按照前述方法处理和分析样品，计算回收率（如表2所示），平均加标回收率为96.25%~106.18%，RSD为2.87%~5.32%，回收率和精密度都能满足分析要求。
表2 加标回收率和精密度试验结果（n=3）
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C16:0-GE
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C18:0-GE
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C18:1-GE
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C18:2-GE
|
C18:3-GE
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1
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109.20
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105.10
|
101.28
|
101.84
|
103.10
|
2
|
103.11
|
96.52
|
95.06
|
93.36
|
93.20
|
3
|
106.23
|
104.15
|
92.42
|
94.57
|
101.30
|
平均回收率（%）
|
106.18
|
101.92
|
96.25
|
96.59
|
99.20
|
RSD（%）
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2.87
|
4.61
|
4.73
|
4.75
|
5.32
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在AOCS标准方法的比对验证实验中，共有25家实验室参加、且均提交两组平行实验结果，取平均值后与我们提交的结果对比见表3。结果显示，本实验室的检验结果与比对检测结果平均值非常接近。
表3检测结果对比
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C16:0-GE
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C18:0-GE
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C18:1-GE
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C18:2-GE
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C18:3-GE
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总含量
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样品1
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检测结果
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5.62
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4.64
|
5.95
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5.69
|
5.52
|
27.42
|
平均值
|
5.32
|
5.01
|
5.94
|
5.78
|
5.86
|
27.96
| |
样品2
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检测结果
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N.D
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N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
平均值
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
| |
样品3
|
检测结果
|
2.50
|
0.44
|
5.64
|
1.43
|
N.D
|
10.00
|
平均值
|
2.72
|
0.36
|
6.08
|
1.68
|
N.D
|
10.85
|