双波长分光光度计

　　在上面介绍的单波长分光光度法测量中，是用两个吸收池，其装参比溶液，在选定的波长下调其透光度为100%(即吸光度A=0)，然后再测量试样溶液的吸光度。

　　当试液中含有两种吸收光谱互相重叠的成分时，用这种单波长分光光度计单独测量待测成分的吸光度就很困难，必须进行萃取分离或加掩蔽剂等才能完成测定。另方面，由于必须使用两个吸收池，吸收池的差异常会影响测量的精度，使测定更微量的成分受到了限制。双波长分光光度计则克服了上述缺点。

　　从光源发出的光分成两束，分别经过各自的单色器2、3后，得到波长为λ1和λ2的两束单色光。借切光器调制，这两束光以定时间问隔交替照射装有试样溶液的吸收池。经检测器的光电转换和电子控制系统的工作，在数字电压表上显示出λ1和λ2的透光差值△T，或是显示两者的吸光度差值△A。

　　根据朗伯-比尔定律，试样溶液在两个波长λ1和λ2的吸光度的差值幽与溶液中待测物质的浓度成比例。双波长分光光度法可将待测成分吸收光谱的任意波长设为零点，测定它与任意其他波长问的吸光度差值。

　　双波长分光光度法具有下列优点：

　　(1)因为仅用个样品池进行测量，不需要用参比吸收池，故可消除参比池与样品池的不同而引起的误差，使分析精度提高数倍;

　　(2)对混浊样品进行测定时，可消除不同混浊度所引起的背景吸收，即基线的变化几乎*被消除;

　　(3)适当选择波长，可掩蔽共存组分的干扰，因此可简化混合组分同时测定的手续及数据处理，并可提高灵敏度和准确度;

　　(4)由于背景吸收及其他干扰的消除，可测定微小光度，能检测出0.01～0.005的消光度值;

　　(5)可应用于薄层色谱及纸上色谱的定量分析，测定时可消除薄层厚度不均匀所引起的误差，使测量基线平稳。

　　但由于双波长分光光度计光路结构和电学线路较为复杂，仪器价格比较昂贵，目前国内双波长仪器并不普遍。应当指出采用单波长分光光度计进行双波长分光光度法的定量分析也是可行的，只是选择的参比波长λ1和测定波长λ2要适当。