冻存细胞到货处理 1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已挥发等 问题，请即时联系。 2、将细胞取出转移至液氮或－80 度冰箱保存，建议尽早复苏。 3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。 细胞复苏 1、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 3、弃上清，沉淀用 5ml 培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中 培养； 4、第二天，换用新鲜培养基继续培养。 细胞传代 1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次： 2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min； 3、弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两个 T25）， 补充新的培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养； 细胞冻存 1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的富衡无血清冻存液（FH7001），混匀后加入冻存管中。 （如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液） 4、 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱 存放 24 小时以上。 本库的细胞系（株）仅用于科研工作