细胞基质金属蛋白酶12活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 细胞基质金属蛋白酶12（MMP-12）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针5-羧基荧光素供体和QXL受体标记的多肽底物RPKPVENvaWRK，在蛋白酶的水解下，解离抑制基团，产生荧光产物，即采用荧光法来测定样品中酶活性的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或*纯化酶样品中基质金属蛋白酶12的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。

技术背景

基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellular matrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissue resorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT₁-MMP、MT₂-MMP、MT₃-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶12（MMP12），又称为巨噬细胞弹力蛋白酶（macrophage elastase），其目标蛋白是弹性蛋白（elastin）、纤维连接蛋白（fibronectin）、层粘蛋白（laminin）、纤维蛋白溶酶原（plasminogen）、尿激酶型纤溶酶原激活物受体（u-PAR）和组织因子通路抑制剂（tissue factor pathway inhibitor）。MMP12与吸烟型肺气肿（smoke-induced emphysema）、肿瘤和其它疾病等发生有关。MMP12酶原型为54kD，而活化型为45kD和22kD。基质金属蛋白酶12的活性检测通过荧光共振能量转移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即传递激发状态的能量由处于较短波长的供体（donor）到覆盖供体波长的受体（acceptor），使得距离依赖性反应的供体的散发光子淬灭（quench）。基于多肽底物RPKPVENvaWRK两端标记的供体荧光探针5-羧基荧光素（5-carboxyfluorescein；5-FAM）受到另一个受体基团QXL的抑制而荧光淬灭（quench）。一旦多肽受到MMP12水解，释放出具有强烈荧光的5-羧基荧光素多肽片段，据此根据其荧光强度（激发波长490nm，散发波长520nm）的变化，来定量测定基质金属蛋白酶12的活性。基质金属蛋白酶12反应系统为：

MMP12

5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2   →    5-FAM-RPKP  +  VE-Nva-WRK-QXL-NH2