细胞被污染只能扔掉吗？还能抢救一下吗？
时间：2023-11-24 阅读：363
常见的细胞污染分为以下几类∶
细胞培养中常见的生物污染类型有好几种，分别是细菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、真菌污染、以及细胞交叉污染。他们在细胞培养中污染的特点如下：
一：细菌污染
细菌污染：细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。
一旦发生细菌污染较易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显混浊现象；有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类；有的培养液改变不明显而又疑有污染，可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min，沉淀中加入无抗生素的培养液2ml，置于37℃培养，24h可得结果。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
看到这种，别犹豫了你的细胞被污染了，那么怎么办呢，基本原则立马扔掉，别扩大污染，如果你的细胞真的十分宝贵，先用带有双抗的PBS反复冲洗几遍，然后再培养液中加入硫酸庆大霉素、新霉素（50ug/ml）等，培养3天后换成带有双抗的培养液培养。
二.支原体污染
特征：最小的微生物，无法通过光学显微镜看见，但可通过电镜观察到。感染支原体的细胞，在某一时间点碎片突然增多，随着传代，细胞状态显著变差。支原体污染可通过气溶胶传播，影响同一细胞房其他细胞。
鉴定方法：PCR法、显色法、荧光染色法等。
处理方法：若细胞状态尚可，添加支原体抑制剂培养2-3代可转阴；若细胞状态很差，建议消杀后丢弃。
三、黑胶虫污染
特征：无明确定义，镜下无法直接观察到。主要表现为细胞状态差，黑点和碎片多，布朗运动。通过检测发现主要为支原体污染，部分为未知的增殖不明显的微生物污染。
处理方式：若细胞状态尚可，添加黑胶虫/支原体抑制剂培养2-3代可转阴；若细胞状态很差，建议消杀后丢弃。
四、真菌污染
特征：呈链球状或丝状。常形成肉眼可见的菌落，培养基颜色无变化或变紫，仅对局部细胞影响较大，其他地方生长正常。会形成孢子，容易污染其他细胞。
处理方法：真菌污染较难除，不建议保留，建议消杀后丢弃。
五、细胞交叉污染
特征：即不同的细胞混杂在一起
鉴定方法：
同种属：STR鉴定，多等位基因数大于3个。
（需考虑本身的遗传背景，如EA.hy 926为融合细胞，本身就包含两套遗传信息）
不同种属：PCR法，对种属特异性基因进行扩增，不同种属产物大小不同。
处理方法：建议重新引种。
六、细胞污染的处理
应对细胞污染的最好对策是预防!预防!再预防!养细胞要勤快，平时所用到的耗材、器皿等要及时高压灭菌，灭菌后超过一周未使用也应重新灭菌。配制的培养基、胰酶、PBS等最好在一周内用完。同时，也应每天查看一下细胞状态。在细胞房内应尽量少地走动，尽量少地说话，若咳嗽或喷嚏时务必背向超净台。
细胞污染后处理方式是丢弃。当个别细胞十分珍贵无法丢弃时可尽力“急救”一下。
那么如何急救呢?
1，判断污染源。一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源︰有无操作不当?培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常?
2，及时处理。若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用;若无法确定则新配培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。
现以贴壁细胞为例向大家介绍下细菌污染时如何“急救”∶
1)，立即弃去培养容器内的培养基，以PBS润洗2~3次，加入胰酶处理至细胞形态略有改变但未脱离容器时弃去胰酶，加入PBS轻轻润洗1遍;
2)，加入20×双抗，浸泡细胞3~5min，弃去双抗;
3)，加入新鲜的培养基(含10×双抗)培养12 h;
4)，12 h弃去培养基以PBS润洗2~3遍后加入培养基(含10×双抗);
5)，传代时以较小转速离心(如平时以1000 r/min离心，则可降为800~900r/min离心)，仍以含10×双抗的培养基培养;
6)，若第二代后镜下找不到细菌，则第三代起可正常培养。正常培养48 h后无反弹则可认为污染已清除。
若为霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48 h后污染未再次出现即可。
若为真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B(两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用)，也可加入300 ug/mL氟康唑培养，污染控制后改用150 ug/mL培养2~3代。
若怀疑支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂(如∶某恒生物)。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20 ug/mL浓度2代后改用10 ug/mL浓度持续培养约2周。
附∶常用抗生素剂量和抗菌范围
