Human AAHA ELISA Kit

特别说明： 
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） 
#: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 
相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 
Human AAHA ELISA Kit检测原理: 
本试剂盒采用双抗原夹心ELISA法。用抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人AAHA
会与包被抗原结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗原和辣根过氧化物酶标记的亲和
素。生物素化的抗原与结合在包被抗原上的人AAHA结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免
疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，
加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，AAHA浓度与OD450值之间呈正比，通
过绘制标准曲线计算出样品中AAHA的浓度。 
Human AAHA ELISA Kit样品收集: 
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃一夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂样品。 
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组
织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，
取上清检测。 
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测  
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先
做预实验，以确定稀释倍数）。 
试验所需自备物品: 
1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 
4. 吸水纸 
检测前准备工作: 
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为200ng/mL）。
然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓
度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔
0ng/mL。如配制100ng/mL标准品：取0.5mL200ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&
样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  
4. 生物素化抗原工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗原稀释液稀释浓缩生物素化抗原(1:100)成工作
浓度。当日使用。 
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。 
标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）