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透析,简单,也不简单! (实验室透析膜选择)

时间:2017-03-06      阅读:10091

自上世纪50年代起,透析就已经成为生命科学实验室分离生物大分子复合物的常用技术,虽然在很长一段时间内,由于超滤及离心技术的推广,透析技术并没有得到很大的改进,特别是传统透析方式由于操作繁琐,耗时等原因,会有不小的困扰。但现在,仕必纯推出了新一代即用型生物技术级透析装置,使透析这项传统的基础实验技术,在使用的简便性和实用性方面得到了长足的进步。
 

透析是根据半透膜对大、小分子不同尺寸的选择性扩散过程,实现分离的技术。常见的蛋白质或核酸样品中,常会含有不需要的小分子物质,如缓冲盐溶液(Tris、PBS)、还原剂(二硫苏糖醇DTT、β-巯基乙醇BME)或保存剂(*、抗菌剂)等。

 

将样品置于透析膜内,透析液置于透析膜外(一般为样品体积的200-300倍),使膜两侧形成浓度梯度,分子会从膜一侧扩散通过膜进入另一侧,并zui终达到平衡。一旦达到平衡,透析(扩散)停止。通常情况下,接近平衡状态时,扩散速率会降低,所以每隔一段时间需要更换透析液,以维持浓度梯度,驱动透析过程进行。

膜的选择是透析成功的关键。半透膜的孔径需足够大,以使小分子物质通过,但同时又需足够“小”,以限制大分子物质。理想的透析膜需很“薄”、具有大小均一的膜孔、且不结合蛋白质或核酸。常见的再生纤维素或纤维素酯即是较为理想的透析膜材质选择。

 

另一个影响透析膜选择的重要参数是截留分子量(MWCO),我们将其定义为膜截留率至少为90%的分子的分子量。但在实际操作中,分子通过膜的扩散过程还受到分子形状、水合程度、离子电荷及极性等因素的影响,所以需做综合测试及评估。

 

样品和透析液的体积也是需要考虑的重要参数,理想的情况是较小的样品体积使用较大的透析液体积,以使浓度梯度zui大化。需要考虑样品体积是因为透析后样品的处理或应用通常具有一定的zui小体积要求。但是只要能满足zui小体积要求,一般不推荐透析过多的样品。因为基于给定样品的膜表面积,小体积样品的透析速率比大体积样品要快得多。此外,样品与固相界面接触的时间越长,样品损失的可能性越高,蛋白质或核酸发生非特异性结合或变性的几率越大。

那么,其它还有什么问题需要关注呢?
 

1)   膜的留分子量(MWCO)到底有多?

 

MWCO可以作为衡量膜截留性能的指标,但MWCO并不是的、的数值,所以选择膜MWCO时,建议根据需要截留的大分子物质和需要扩散去除的小分子物质,对不同MWCO的膜进行测试,一般推荐膜MWCO为需截留物质分子量的50-80%,同时需至少为需去除物质分子量的100倍。

 

早期的透析膜产品因为生产技术及质控的原因,MWCO一般控制在2kD-20kD以内,经过技术革新,现在我们可提供截留分子量范围更广的透析膜产品,低至0.1kD,高可达1,000kD。每种规格的透析膜均具有特定的截留性能,可使用已知分子量的物质对MWCO进行检测。

 

2)  透析时一定要搅拌吗?
 

搅拌可显著缩短透析时间。所有的膜都具有内表面和外表面,从膜的样品一侧到透析液一侧并没有固定直径的通道,相反,样品中的小分子量物质扩散进入内表面的膜孔,然后通过膜内部,再从膜外表面的膜孔透出,进入膜外扩散层“微环境”,扩散层内小分子物质的浓度显著高于透析液的其它位置。搅拌可快速、有效地打破扩散层微环境,维持浓度梯度,保证透析进行。

 

3)  透析温度应如何把握?
 

温度对透析的进行也有一定程度地影响,因为分子在较高的温度下会更快地移动扩散,但前提是操作温度不影响产品的活性。所以,除特殊样品外,一般在环境温度或室温下进行即可。

 

4)  怎样判定透析已经结束?
 

判定透析结束并没有简单、的标准。一般来说,只要样品中的小分子含量降低到不影响后续实验即可认为透析完成。

 

5)  需要对膜进行预处理吗?
 

spectrumlabs透析膜出厂前已经预处理。部分规格的膜产品可能含有少量的甘油或硫化物,正常情况下,这些小分子在透析过程中即可自动扩散去除。如处理的样品较为敏感,也可在使用前用超纯水对膜进行预冲洗,对于在膜生产过程中可能存在的痕量重金属,可使用重金属漂洗液去除。

 

Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置采用预制型膜管,极大地提高了样品/膜比表面积,可显著缩短分子的迁移距离,使透析速率更快。同时Spectra/Por Micro Float-A-Lyzer微量即用型透析装置可处理低至100μl的样品,如使用较大量的透析液,维持高浓度梯度,即可得到*的透析速率。

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客服

美国光谱医学(高精度,即用型)产品目录

Spectra/Por 6 dialysis tubing

货号  名称  规格  参数

132636 美国光谱医学透析袋MD181000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132638 美国光谱医学透析袋MD381000)压平宽度38mm,直径24mm,单位长度体积4.6 ml/cm

132640 美国光谱医学透析袋MD451000)压平宽度45mm,直径29mm,单位长度体积6.4 ml/cm

132620 美国光谱医学透析袋MD182000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132625 美国光谱医学透析袋MD382000)压平宽度38mm,直径24mm,单位长度体积4.6 ml/cm

132633 美国光谱医学透析袋MD452000)压平宽度45mm,直径29mm,单位长度体积6.4 ml/cm

132590 美国光谱医学透析袋MD183500)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132594 美国光谱医学透析袋MD543500)压平宽度54mm,直径34mm,单位长度体积9.3 ml/cm

132592 美国光谱医学透析袋MD453500)压平宽度45mm,直径29mm,单位长度体积6.4 ml/cm

128056 美国光谱医学透析袋MD88000)压平宽度8mm,直径5.1mm,单位长度体积0.2 ml/cm

132579 美国光谱医学透析袋MD128000)压平宽度12mm,直径7.5mm,单位长度体积0.45 ml/cm

128058 美国光谱医学透析袋MD188000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132580 美国光谱医学透析袋MD248000)压平宽度24mm,直径15mm,单位长度体积1.8 ml/cm

132582 美国光谱医学透析袋MD328000)压平宽度32mm,直径20.4mm,单位长度体积3.3 ml/cm

132584 美国光谱医学透析袋MD408000)压平宽度40mm,直径25.5mm,单位长度体积5.1 ml/cm

132586 美国光谱医学透析袋MD508000)压平宽度50mm,直径32mm,单位长度体积7.9 ml/cm

128106 美国光谱医学透析袋MD810000)压平宽度8mm,直径5.1mm,单位长度体积0.2 ml/cm

132570 美国光谱医学透析袋MD1210000)压平宽度12mm,直径7.5mm,单位长度体积0.45 ml/cm

128118 美国光谱医学透析袋MD1810000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132572 美国光谱医学透析袋MD2410000)压平宽度24mm,直径15mm,单位长度体积1.8 ml/cm

132574 美国光谱医学透析袋MD3210000)压平宽度32mm,直径20.4mm,单位长度体积3.3 ml/cm

132576 美国光谱医学透析袋MD4510000)压平宽度45mm,直径29mm,单位长度体积6.4 ml/cm

128156 美国光谱医学透析袋MD815000)压平宽度8mm,直径5.1mm,单位长度体积0.2 ml/cm

132560 美国光谱医学透析袋MD1215000)压平宽度12mm,直径7.5mm,单位长度体积0.45 ml/cm

128158 美国光谱医学透析袋MD1815000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

132562 美国光谱医学透析袋MD2415000)压平宽度24mm,直径15mm,单位长度体积1.8 ml/cm

132564 美国光谱医学透析袋MD3215000)压平宽度32mm,直径20.4mm,单位长度体积3.3 ml/cm

132566 美国光谱医学透析袋MD4515000)压平宽度45mm,直径29mm,单位长度体积6.4 ml/cm

128206 美国光谱医学透析袋MD825000)压平宽度8mm,直径5.1mm,单位长度体积0.2 ml/cm

132550 美国光谱医学透析袋MD1225000)压平宽度12mm,直径7.5mm,单位长度体积0.45 ml/cm

128218 美国光谱医学透析袋MD1825000)压平宽度18mm,直径11.5mm,单位长度体积1.1 ml/cm

128224 美国光谱医学透析袋MD2425000)压平宽度24mm,直径15mm,单位长度体积1.8 ml/cm

132552 美国光谱医学透析袋MD2425000)压平宽度28mm,直径18mm,单位长度体积2.5 ml/cm

132554 美国光谱医学透析袋MD3425000)压平宽度34mm,直径22mm,单位长度体积3.7 ml/cm

132539 美国光谱医学透析袋MD1050000)压平宽度10mm,直径6.4mm,单位长度体积0.32 ml/cm

132540 美国光谱医学透析袋MD1250000)压平宽度12mm,直径7.5mm,单位长度体积0.45 ml/cm

132542 美国光谱医学透析袋MD2850000)压平宽度28mm,直径18mm,单位长度体积2.5 ml/cm

132544 美国光谱医学透析袋MD3450000)压平宽度34mm,直径22mm,单位长度体积3.7 ml/cm

 

 

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