多肽合成常见问题及解答
时间:2015-09-15 阅读:1647
1. 如何保存合成的多肽?
多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前, 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,的方法是以小的工作样量存放。
对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解*,因为这种多肽可易空气氧化, 在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。
2. 多肽的溶解性怎样?都溶于哪些溶剂?
大多数肽的溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽, 需要DMF(二甲基甲酰胺)、脲、guanidinium(胍盐)、chloride(氯化物)或acetonitrile(乙腈)来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。
残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。
3. 多肽的保存如何操作?
包装 1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如,氨基酸分析决定的肽含量是80%, 在1mg样品中,那么瓶中毛重是1.25mg。
大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水, 例如,25mg样品中肽百分比为90%,那么,实际肽量为25mg×90%=22.5mg
不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%, 而肽含量相关带电基团(如Arg, Lys )的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。
所有产品应存于冰箱, 为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。
溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的,为避免样品的反复冻融, 分成小样存放。一份样品融冻后未用完, 应扔掉,细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦, 为克服此,肽应溶于无菌水, 或肽溶液用0.2μ M滤膜过滤。
4. 如何重建多肽重建过程如何操作?
多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时,要注意使初始浓度比要求浓度大,如果多肽仅有限溶解性, 这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。
如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解:
对碱性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)
酸性肽用稀氨水(含Asp, lu)
对极疏水的肽用10%有机修饰物(acetonitrile , Methanol)
极不溶的肽用DM50或DMF
guanidine hydrochloride或脲的浓溶液也很有用, 与上述方法合用, 声处理也是溶解多肽的有效手段。