7月30日周四报道分享，Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，Elisa（酶联免疫吸附测定）实验是目前应用比较较为广泛的一种实验方法，其技术项目可谓是免疫学反应以及在实验应用到科研生产中较为广泛以及灵敏的技术手段。虽然Elisa实验用的地方比较多，但是很多刚刚操作实验的新手会出现很多问题，另外就是很多老客户操作过程中也会出现或大或小的问题，其实这些问题很多时候都是在实验前以及实验过程中很多细节没有注意到导致的，很多客户在刚开始做Elisa（酶联免疫吸附测定）实验时因为没有做过，所以在做的过程中就会面临很多的困难，虽然有师兄师姐铺路作为指导，但自己在单独操作的时候还是常常会做得一塌糊涂，比如说以下这些情况都是会经常发生的：花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低等等，有时候很多客户自己也为此苦恼过很长一段时间，不知道问题出在哪里，更不知道该怎么继。

但是随着自己的心态越来越好，以及在实验过程中技术水平得到一些提高，很多时候或多或少地也掌握了Elisa（酶联免疫吸附测定）实验的脾气，也就是我们常说的熟能生巧，现在的话做Elisa（酶联免疫吸附测定）已是轻车熟路了，但是放在以前技术一种抗体就得用整整一下午甚至一天还算得头昏眼花的，现在的话就算你给我十个八个的从包被到显色，基本上都能一个工作日就能基本搞定。所以动手的事情还是得熟能生巧，经常做才能更熟悉的操作，Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，由我们为大家作为一个讲解，起到一个抛砖引玉的作用，也是我们在做Elisa（酶联免疫吸附测定）实验多年的一个经验总结，希望能够对大家的实验有所帮助。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，在Elisa实验中，关于包被原的性质真的很重要，比如蛋白的浓度，还有就是是否降解，这些都关系到你做出来的抗体能否被其识别，所以保存抗原这一步很重要，希望大家能够重视，我们在做重组蛋白时，技术老师都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。

还有就是有的包被原有可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，关于包被的方法简要列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入Elisa（酶联免疫吸附测定）板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，关于ELISA包被液的选择，一般来讲，我们都是选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但是有时由于试验的需要以及包被原的特殊性，也可能采用中性的缓冲溶液来包。但是应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。

具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，关于ELisa实验中的封闭：其实就是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥Elisa（酶联免疫吸附测定）后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但终选用什么，要依据试验具体来实践。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，关于ELisa实验中的洗涤板：可以说在Elisa（酶联免疫吸附测定）操作中，洗涤是主要的关键技术，也是Elisa实验的核心。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差，人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外)，洗的不*或串了孔，对如此灵敏的Elisa（酶联免疫吸附测定）系统可是不小的影响。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，ELIsa实验中关于加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时一定要换枪头。标本稀释一般可用PBS稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅，这些都是需要注意的事项。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，关于Elisa实验显色:显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，在Elisa实验中，每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好分析，这一点要提前做好准备。

Elisa（酶联免疫吸附测定）实验部分经验总结分享@今日头条，以上这些就是在ELisa实验中的部分经验总结分享，仅供大家作为参考，希望对大家在操作Elisa实验的时候能有所帮助，另外，购买我司Elisa试剂盒，可以享受免费代测服务哦，我司供应产品有Elisa试剂盒，生化试剂盒，生化试剂，中药标准品，进口试剂代理，技术服务等，欢迎大家咨询订购。