极威生物关于Elisa实验背景深全部呈有色原因及解决方案
时间:2018-11-13 阅读:100
昨天,浙江大学医学院附属邵逸夫医院客户老师王老师咨询我司关于Elisa实验背景深全部呈有色原因的问题,并咨询我司技术该问题有没有解决方案?是什么原因导致的?会不会是产品的问题?因为之前客户从我司订购了好几个elisa试剂盒,都没有出现这个问题,但是这次订货后,是自己的学生做的实验,由于学生是新手,然后遇到了这个问题,我司销售将王老师在ELISA实验中遇到的问题转达给了我司技术部,技术部陈技术接到问题后,做了回复:在ELISA实验中,实验背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)的原因可能存在的原因有一下几点:
原因1:由于实验过程中洗涤不充分,洗后未拍干,导致样品中其它成分残留或酶标记物残留
方案:洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,然后*拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。
原因2:由于底物污染,并且未避光保存,导致出现颜色
方案:应弃去底物,并重新配置
原因3:由于样品稀释液污染
方案:应弃去稀释液,并重新配置
原因4:由于吸头重复使用,并未洗净或消毒不*
方案:吸头应尽可能一次性使用
原因5:不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间)
方案:为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。应*按照说明书要求
原因6:偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高
方案:按照说明书调整到合适的浓度
原因7:ELISA板子不正确的贮存
方案:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板
原因8:没有正确封闭
方案:在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
原因9:样本溶血严重
方案:建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。
以上9中解决方法是我司技术为客户提供的可能性解决方案,以上解决方案仅供参考,具体原因还得以具体的实验步骤来分析,这些都是由多年的实验积累汇总出来的,我司销售将解决性方案发给客户后,客户发给了学生,并回复说谢谢我们的技术支持,回复快,能及时解决问题,我司销售回复这是我们应该做的,分内的事,希望客户能满意。
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