1. 色谱柱的平衡

　　反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得zui大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤：

　　a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)

　　b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

　　2. 色谱柱的再生

　　长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。

　　建议用来冲洗柱子的溶剂体积

　　色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积

　　125-4mm 1.6ml 30ml

　　250-4 mm 3.2ml 60ml

　　250-10mm 20ml 400ml

　　选择再生方法：

　　极性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料)的再生：

　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

　　非极性固定相(如反相色谱填料RP-18，RP-8，CN等)的再生：水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

　　注意：

　　a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液*流出。

　　b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够*洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

　　3. 色谱柱的维护

　　a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

　　b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

　　c.避免流动相组成及极性的剧烈变化

　　d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理

　　e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中

　　f.氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。