水性C18色谱柱通用使用指南
时间：2024-06-20 阅读：333
水性C18色谱柱是一种专门设计用于在高水相流动相条件下工作的反相高效液相色谱（HPLC）柱。它通常用于极性和亲水性化合物的分离。以下是水性C18色谱柱的通用使用指南：
1.色谱柱的安装
检查与连接：在安装前确保色谱柱处于良好状态，没有损坏。使用适配器将色谱柱牢固地连接到HPLC系统中，确保无泄漏。
冲洗：在初次使用或长时间不使用之后，应使用纯溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗色谱柱，通常以0.5-1.0mL/min的流速进行15-30分钟的冲洗。
2.流动相的选择与制备
高水相流动相：由于这是水性C18色谱柱，应使用高水相比例的流动相，典型的是80%以上的水相。常用的水相包括纯水、含有少量缓冲盐的水溶液（如磷酸盐缓冲液）。
有机相助溶剂：常用的有机相助溶剂包括乙腈或甲醇。根据目标化合物的极性，调整有机相比例。
pH调节：对于大多数分析物，流动相的pH值应该控制在色谱柱能够承受的范围内（通常为2-8），并且应尽量接近中性以保护色谱柱。
3.样品制备
样品溶剂：样品应溶解在流动相中或与流动相相似的溶剂中，以减少峰形变差和拖尾现象。
过滤：样品溶液应通过0.22μm或0.45μm的滤膜过滤，以除去颗粒物，防止堵塞色谱柱。
4.操作条件
流速：一般建议在0.5-1.5mL/min的流速范围内操作，根据具体分析需求调整。
柱温：控制柱温在20-40°C之间，具体温度根据分离效果优化。
进样量：为避免柱超载，通常推荐进样量在1-20µL范围内，根据样品浓度和柱子尺寸调整。
5.色谱柱的维护
清洗：定期用高比例有机溶剂（如乙腈或甲醇）冲洗色谱柱，尤其是在连续使用后或更换流动相前。
储存：短期存放时，用流动相进行冲洗并保持湿润。长期存放时，建议用有机溶剂（如乙腈）冲洗后密封保存。
再生：如果色谱柱性能下降，可以尝试用梯度冲洗法再生色谱柱，从高水相到高有机相，再返回高水相，逐步冲洗。
6.常见问题及处理
柱压升高：检查流动相和样品是否有颗粒物，必要时更换过滤器或预柱。也可能需要用强溶剂冲洗色谱柱。
峰形变差：检查样品溶剂与流动相的匹配性，调整进样量；确保色谱柱没有堵塞或老化。
分离度下降：优化流动相比例、流速和柱温，或考虑更换色谱柱。
通过遵循以上指南，可以有效地使用和维护水性C18色谱柱，确保其最佳性能和长使用寿命。