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面议RainDance RainDrop Source产品简介:
RainDrop™数字PCR(dPCR)系统可将反应体系无限稀释至1000万份,每个小液滴只有皮升级大小,因此系统在检测灵敏度、定量准确性、多重反应技术等方面都远远优于现有技术和同类产品。
基于系统的皮升级液滴技术,RainDrop™数字PCR系统可以实现目标分子的定量,可应用于重要研究应用领域如低频肿瘤基因检测、基因表达谱和DNA拷贝数的定量、SNP分析检测等方面,这从根本上提高了现有分子检测平台的性能。
产品特点及优势
l 灵敏度高
能够检出250,000个野生型分子中的1个突变,检测极限低至1/1,000,000。
l 多重反应, 最高可实现10重PCR分析:
采用单分子多色检测技术仅利用VIC和FAM两种荧光素,设置不同探针浓度可以对同一样品进行最高达10重PCR检测。
l 灵活的反应设计
根据用户需要的灵敏度和待测基因数目需要来优化多重PCR反应的数量。
l 闭管设计
PCR反应结束后,扩增产物不开盖检测,无需担心气溶胶污染,确保检测质量。
l 成熟的皮液滴技术平台
RainDrop™系统能够在半小时内高效均一地制备高达1000万个皮升大小的液滴。
l 成本低
可以对每个待测基因待测位点给出数字答案,实现单分子定量,同等价位下产生的数据高出同类产品几个数量级。
精确的结果实现定量
RainDrop ™系统将每种标记单一颜色(single-color-per-marker)的PCR模式转换成更加扩展且精确的每种标记多色且多强度(multi-multicolor and intensity-per-marker)的方法。这种新方法检测1000万个皮升大小的液滴内单分子PCR产物荧光信号,比现有方法灵敏度提高了500-10,000倍。由于每个信号代表一个分子,通过统计荧光信号类型、强度和液滴数量,研究人员可快速确定包含特定DNA目标的液滴的数量,计算出不同待测基因的起始含量。
更高的检测灵敏度
为了评估EGFR突变的检测下限(LLOD),将野生型DNA与不同浓度的突变体DNA混合,进行突变位点检测。在10,000,000个液滴体系中,其中250,000个野生型分子中混入1个突变基因都能够被检测到,且稀释浓度与稀释次数成线性关系(R2 = 0.998),其LLOD为1/1,000,000(如图所示),这是根据突变体比野生型比率的平均值加3倍标准偏差所计算出来的。
*的多重分析dPCR
通过调整每个目的基因的探针浓度,Raindrop ™数字式PCR技术只用VIC和FAM两个荧光基团即可同时测定4个突变以及野生型基因,下图是进行5重PCR分析检测的分析图。通过调整反应条件,多重分析最高可以扩充到10重,快速而有效地进行单个DNA样品中多个突变的检测、鉴定和测定。
简单的操作流程
RainDrop ™系统包括Source—样品制备系统和Sense—数据读取系统两部分。所有操作有仪器自动完成,研究者只需将PCR master mix 配好,无需其他操作,试验流程简洁方便。
Source系统可以在30min时间里制备1000万个皮升大小的液滴(包括1、2步操作步骤);Sense系统可以在3.5 hours时间里将全部液滴进行荧光检测(包括4.5操作步骤)。
应用领域
Raindrop™ dPCR技术通过荧光读值直接得出DNA分子的个数,是对起始样品的定量,因此特别适用于传统QPCR依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:
u 拷贝数变异
u 突变检测
u 基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)
u 二代测序结果验证
u miRNA表达分析
u 单细胞基因表达分析