1.柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

　　1.1压力过高：

　　这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。

　　（1）首先断开真空泵的入口处，此时，PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果，液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

　　处理方法：

　　用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查；

　　（2）打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

　　处理方法：

　　将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI（6.7Bar）以下，过滤白头正常，再检查；

　　（3）把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

　　处理方法：

　　如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

　　假如，按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但是，一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以，尽量少用。

　　1.2压力过低

　　压力过低的现象一般是由于系统泄漏

　　处理方法：

　　寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然，还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。

　　处理方法：

　　打开Purge阀，用3～5mL/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

　　2.漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。

　　2.1基线漂移

　　一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果，你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下（220nm）平衡时间相对会比较长，但是，如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：

　　①紫外灯能量不足。

　　解决方法：

　　更换新的紫外灯；

　　②柱温波动。

　　解决方法：

　　控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　③流通池被污染或有气体。

　　解决方法：

　　用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用盐酸）。

　　④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

　　解决方法：

　　检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

　　⑤样品中有强保留的物质（高K'值）以馒头峰样被洗脱出，从而，表现出一个逐步升高的基线。

　　解决方法：

　　使用保护柱，如有必要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

　　⑥检测器没有设定在最大吸收波长处。

　　解决方法：

　　将波长调整至最大吸收波长处；

　　⑦流动相的pH值没有调节好。

　　解决方法：

　　加适量的酸或碱调至最佳pH值；

　　2.2保留时间漂移

　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，你要考虑以下原因：

　　①温控不当。

　　解决方法：

　　调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　②流动相比例变化。

　　解决方法：

　　检查四元泵的比例阀是否有故障。

　　③色谱柱没有平衡。

　　解决方法：

　　在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

　　④流速变化。

　　解决方法：

　　重新设定流速。

　　⑤泵中有气泡。

　　解决方法：

　　从泵中除去气泡。

　　2.3峰型异常问题

　　峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

　　①所有峰均为宽峰。

　　解决方法：

　　系统未达到平衡；

　　溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；

　　色谱柱尺寸及类型选择不正确；

　　色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；

　　温度变化造成的影响。

　　②所出峰比预想的小。

　　解决方法：

　　样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确，定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

　　③色谱图中未出峰。

　　解决方法：

　　系统未进样或样品分解；

　　泵未输液或流动相使用不正确；

　　检测器设置不正确；

　　针对以上情况成因作相应调整即可。。。

　　④一个峰或几个峰是负峰。

　　解决方法：

　　流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

　　⑤所有峰均为负峰。

　　解决方法：

　　信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；

　　光学装置尚未达到平衡。

　　⑥出现双峰或肩峰。

　　解决方法：

　　进样量过大；样品浓度过高；

　　保护柱或色谱柱柱头堵塞；

　　保护拄或色谱柱污染或失效；

　　柱塌陷或形成短通道。

　　⑦前伸峰。

　　解决方法：

　　进样量或样品浓度高；

　　溶解样品的溶剂较流动。