LONZA CC-5035加强版内皮细胞培养基细胞复苏操作规程
时间：2017-10-31 阅读：2411
培养基配制见文《LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基配制》。
注意：扩增环境：37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 湿度。
1.当起始接种细胞来自冻存细胞，推荐接种密度：
细胞类型 | 推荐冻存后接种密度（活细胞/cm2) | 培养瓶/培养板zui低数量 |
HUVEC | 2500 | ≥5 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask
|
HUVEC-XL | 2500 | ≥12 x T-225 flasks OR
|
Non-HUVEC Endothelial
| 5000 | ≥2 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask |
备注 | 基于zui低细胞数量和活力估算。更准确接种数量和活性见COA。 | 只要能达到接种密度，也可以使用其他规格的培养板。 |
2.根据推荐接种密度，估算细胞培养容器的数量和有效表面积。
3.按1 ml/5 cm2 在培养容器中添加LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基，并且在37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 湿度条件下预孵至少30分钟。
4.打开前先用酒精或异丙醇擦拭冻存管。在无菌环境下，快速扭开盖子1/4再旋紧。 37°C水浴解冻冻存管，小心不要浸没管子。随时关注管子，zui后一点冰也融化后就马上拿出管子。如果细胞解冻超过2分钟，会影响实验结果。
注意：不能用离心方法分离细胞和冻存保护液。这个动作比培养中的DMSO残留更伤害细胞。
5.使用微量移液器小心混匀细胞悬液，加入培养容器。小心混匀。放回37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 湿度培养箱。
注意：内皮细胞比其他细胞更容易贴冻存管壁。要转移全部细胞需要额外施力（more forceful
trituration）。
LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基细胞复苏规程由红荣微再翻译整理。
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LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基是原LONZA内皮细胞培养基的加强版，优化用于人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）培养，扩增加速。包含2%FBS和BBE。不含外源VEGF（血管内皮生长因子）。
LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基需要混合CC-5036和CC-4542两个组份。
产品订购信息（LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基）
品牌 | 货号 | 产品描述 | 包装 |
LONZA | CC-5035 | EGM-Plus BulletKit (CC-5036 +CC-4542 ) LONZA CC-5035 EGM-Plus内皮细胞培养基 | 1 Kit |
LONZA | CC-5036 | EBM-Plus Endothelial Cell Basal Medium-Plus 内皮细胞基础培养基，加强版 | 500mL/瓶 |
LONZA | CC-4542 | EGM-Plus SingleQuots 内皮细胞培养基添加剂，加强版 | Kit |
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